第二章紫外可见分光光度计的使用第一节概述紫外可见分光光度法 .pdf

第二章 紫外­可见分光光度计的使用 第一节 概述 紫外­可见分光光度法 （Ultraviolet­visible  spectrophotometry）通常是指利用物质对  200~800nm  光谱区域内的光具有选择性吸收的现象，对物质进行定性和定量分析的方 法 。按 测 量 光 的单 色 程 度 （即 含 波 长 范 围 的 宽 窄 程 度 ）分 为 分 光 光 度 法 （Spectrophotometry）和比色法 （Colorimetry）。利用比较溶液颜色深浅的方法来确定溶 液中有色物质的含量方法称比色法。应用分光光度计，根据物质对不同波长的单色光的 吸收程度不同而对物质进行定性和定量分析的方法称分光光度法 （又称吸光光度法）。 分光光度法中， 按所用光的波谱区域不同， 又可分为紫外分光光度法和可见分光光度法， 合称为紫外­可见分光光度法。在紫外及可见光区用于测定溶液吸光度的分析仪器称为 紫外-可见分光光度计（简称分光光度计）。 用于测量和记录待测物质分子对紫外光、可见光的吸光度及紫外­可见吸收光谱，并 进行定性定量 以及结构分析的仪器，称为紫外­可见吸收光谱仪 （Ultraviolet­visible  absorption spectrumeter）或紫外­可见分光光度计 （Ultraviolet­visible spectrophotometer）。 一、仪器工作原理 物质的紫外­可见光谱直接地反映了物质分子的电子跃迁，与物质的结构直接相 关，不同的物质其紫外­可见吸收光谱不同。而吸收强弱又与吸光物质的量有关。因此 可以由物质光谱的特异性对物质进行定性分析，并根据吸收强度对物质作定量测试。 ① 在一定的条件 下，吸光物质对单色光的吸收符合朗伯­比尔定律，即  A = ebc  上式中 A 为吸光度；b 为光程长度 （即吸收池厚度），单位为 cm；c 为吸光物质的 物质的量浓度，单位为 mol/L；e 为摩尔吸光系数，单位为 L/(mol∙cm)； 由上式可知，当 b、e 一定时，吸光物质的吸光度为其浓度 c 的单值（线性）函数。 因此对吸光物质的浓度的测试可直接归结为对吸光度 A 的测试。 二、仪器的类型和基本组成部分  1．仪器的分类 紫外­可见分光光度计按使用波长范围可分为：可见分光光度计和紫外­可见分光光 ① 应用朗伯­比尔定律的条件：一是必须使用单色光；二是吸收发生在均匀的介质中；三是吸收过程中，吸光物质互 相不发生作用。 1  度计两类 （统称为分光光度计）。前者的使用波长范围是 400～780nm；后者的使用波长 范围为  200～1000nm。可见分光光度计只能用于测量有色溶液的吸光度，而紫外­可见 分光光度计可测量在紫外、可见及近红外光区有吸收的物质的吸光度。紫外­可见分光 光度计按光路可分为单光束式及双光束式两类； 按测量时提供的波长数又可分为单波长 分光光度计和双波长分光光度计两类。  2．仪器的基本组成部分 目前，紫外­可见分光光度计的型号较多，但它们的基本构造都相似，都由光源、单 色器、样品吸收池、检测器和信号显示系统等五大部件组成，其组成框图见图 2­1  。 光源→单色器→吸收池→检测器→信号显示系统 图 2­1  分光光度计组成部件框图 由光源发出的光，经单色器获得一定波长单色光照射到样品溶液，被吸收后，经检 测器将光强度变化转变为电信号变化，并经信号指示系统调制放大后，显示或打印出吸 光度 A （或透射比 τ） ，完成测定。 （1）光源 光源是提供入射光的装置。可见光区常用的光源为钨灯，可用的波长 范围为 350~1000nm；紫外光区常用的光源为氢灯或氘灯（其中氘灯的辐射强度大，稳 定性好，寿命长，因此近年生产的仪器多使用氘灯 ），它们发射 的连续波长范围为  180~360nm。 （2）单色器 单色器是将光源辐射的复合光分成单色光的光学