禾谷镰孢菌茁-微管蛋白基因的克隆及在原核细胞中的表达.pdf

摇 南京农业大学学报摇 2011,34(1):51-56 摇 Journal of NanjingAgricultural University http:/ / 試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試試 张聪,徐建强,于俊杰,等.禾谷镰孢菌茁-微管蛋白基因的克隆及在原核细胞中的表达[J].南京农业大学学报,2011,34(1):51-56 禾谷镰孢菌 茁-微管蛋白基因的克隆及 在原核细胞中的表达 1 1,2 1 1 1 1* 张聪 ,徐建强 ,于俊杰 ,陈长军 ,王建新 ,周明国 (1.南京农业大学植物保护学院/ 农业部作物病虫害监测与防控重点开放实验室,江苏 南京210095; 2.河南科技大学林学院,河南 洛阳471003) S 摘要:分别扩增了禾谷镰孢菌(Fusariumgraminearum)对多菌灵(MBC)敏感菌株(MBC )的茁 -微管蛋白基因(茁 -S)和茁 - 1 1 2 MR HR 微管蛋白基因(茁 -S),及多菌灵中抗菌株(MBC )和高抗菌株(MBC )的茁 -微管蛋白基因(茁 -MR 和茁 -HR),测序正 2 2 2 2 -1 确后连接到pET32a(+)原核表达载体上,转化至大肠杆菌Rosepta感受态中,经IPTG(1 mmol·L )诱导,得到了N末端融 3 合6伊His纯化标签的表达产物。 SDS鄄PAGE 电泳分析表明:在大肠杆菌中表达了相对分子质量约68伊10 的蛋白,和预测蛋 TM 白大小一致,表达的产物主要以包涵体的形式存在。 表达的蛋白经HisTrap HP Columns纯化并做了Western鄄blot验证,结 果表明,该蛋白能与抗His标签的单抗发生特异性反应。 关键词:禾谷镰孢菌;茁-微管蛋白基因;原核表达;纯化;Western鄄blot 中图分类号:S432郾1摇 摇 摇 摇 文献标志码:A摇 摇 摇 摇 文章编号:1000-2030(2011)01-0051-06 Cloning and prokaryotic expression of the 茁