表达结核杆菌esat16 基因重组耻垢分枝杆菌的 - 南方医科大学学报.pdf

+ ?6 + 6((d6g=‘@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@@南方医科大学学报gi@NLVQ@0YM@RE9\‘ 表达结核杆菌!#$% 基因重组耻垢分枝杆菌的构建及其功能研究 李 岩!鲍 朗!张会东!李娅莎!朱海龙四川大学华西医学中心基础与法医学院感染免疫研究室!四川 成都 ’(() *# 摘要!目的 构建表达结核分枝杆菌 !#$+ 基因的重组耻垢分枝杆菌并对其免疫功能进行研究! 方法 采用 ,-. 技术 克隆结核分枝杆菌 基因 构建大肠杆菌 分枝杆菌穿梭表达质粒 经酶切分析和 测序证实 !#$+ ! /01+!#$ 23# 6 ! 中 以 检测 蛋白在重组 连接片断的正确性后 用电穿孔法将重组质粒转染到耻垢分枝杆菌45 *77 2%,#8! !#$% 耻垢分枝杆菌中的表达! 以重组耻垢分枝杆菌感染小鼠巨噬细胞 #3#%*半定量 .$%,-. 检测#3#%* 细胞诱导型一 氧化氮合酶 # 表达水平 裂解巨噬细胞 计数胞内存活细菌数 结果 重组耻垢分枝杆菌构建成功 经热诱导后可以 93: $ % ! 的蛋白 与预期值一致 重组耻垢分枝杆菌能够诱导 细胞活化表达 并增强 表达相对分子质量约为 ((( #3#%* 93: $% 巨噬细胞的杀伤活性 重组耻垢分枝杆菌在胞内存活数低于对照组 !!(;(7 结论 表达结核分枝杆菌 !#$% 基因的 重组耻垢分枝杆菌具有免疫原性 为构建新型结核疫苗提供了实验基础 % ! ’ ’ ’ 关键词 大肠杆菌 分枝杆菌穿梭质粒 重组耻垢分枝杆菌 巨噬细胞 !#$% ! 中图分类号! 文献标识码!