r2藻红蛋白标记抗体荧光探针的高效制备及其在 - 南京农业大学学报.pdf

南京农业大学学报 　2009, 32 (2) : 92 96 　 J ou rna l of N anj ing A g ricu ltu ra l Un ivers ity h ttp : / / nauxbnjaueducn 颜世敢 , 朱丽萍 , 张玉忠 , 等. R 藻红蛋白标记抗体荧光探针的高效制备及其在禽流感病毒检测中的应用 [ J ]. 南京农业大学学报 , 2009 , 32 (2) : 92 96 R 藻红蛋白标记抗体荧光探针的高效制备 及其在禽流感病毒检测中的应用 1, 2 3 4 4 2 1 颜世敢 , 朱丽萍 , 张玉忠 , 周百成 , 张秀美 , 李雁冰 ( 1. 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室 , 黑龙江 哈尔滨 　150001; 2. 山东省农业科学院畜牧兽医研究所 , 山东 济南 250 100; 3. 山东轻工业学院食品与生物工程学院 , 山东 济南 250353; 4. 山东大学微生物技术国家重点实验室 , 山东 济南 250 100) 摘要 : 用适宜摩尔浓度的异型双功能交联剂 SPD P将 R 藻红蛋白与纯化的禽流感病毒 H9 亚型多克隆抗体交联 , 并经高 效液相色谱纯化制备 R 藻红蛋白标记抗体荧光探针 。以溴化氰活化的琼脂糖微球为固相载体 , 采用双抗体夹心法建立固 相免疫荧光检测法 , 以制备的 R 藻红蛋白标记抗体荧光探针检测禽流感病毒 H9 尿囊毒 。结果表明 , 阳性微球在蓝 、绿 光激发下发射桔黄色荧光 , 荧光明亮 , 无背景光干扰 , 特异性好 , 灵敏度高 , 可检测蛋白浓度为 185 ×10 - 5 m g ·mL - 1 的 H9 亚型尿囊毒 。R 藻红蛋白标记探针的检测灵敏度高于 F ITC标记探针 , R 藻红蛋白可替代 F ITC或与 F ITC等荧光染 料一起用于多色荧光免疫检测 。 关键词 : R 藻红蛋白; 荧光标记 ; 固相免疫荧光检测 ; 禽流感病毒 中图分类号 : S852 659　　　文献标志码 : A 　　　文章编号 : (2009) 02 0092 05 Eff ic ien t prepara tion of Rphycoerythr inlabeled an tibody probe and imm unofluorescence detection for av ian influenza v irus 1, 2 3 4 4 2 1 YAN Sh igan , ZHU L ip ing , ZHAN G Yu zhong , ZHOU B