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牛奶中四环素类抗生素的测定 北京莱伯泰科仪器有限公司 前言： 四环素类抗生素已被广泛应用于奶牛的疾病治疗和饲 料药物添加剂中。四环素类抗生素通过在奶牛体内的积累， 而进入牛奶当中，对公众健康造成危害。本文采用全自动 固相萃取系统对牛奶样品进行前处理，并采用HPLC进行分 析，建立了一套牛奶中四环素类抗生素的测定方法。 1、 实验部分：  1.1 仪器与试剂 SPE800 全自动固相萃取系统（北京莱伯泰科仪器有限公司，北京） LC600 二元高压梯度高效液相色谱系统（北京莱伯泰科仪器有限公司，北京） EV331 旋转蒸发仪（北京莱伯泰科仪器有限公司，北京） 土霉素、四环素、金霉素标准物质：纯度=95% Mcllvaine 缓冲溶液：将 1000ml 0.1mol/L 的柠檬酸溶液与625mL 0.2mol/L 磷酸氢二钠混合。 0.1mol/L Na2EDTA-Mcllvaine 缓冲溶液：称取 60.5g 乙二胺四乙酸二钠放于 1625mL Mcllvaine 缓冲 溶液中，溶解，摇匀。 土霉素、四环素、金霉素混合标准储备溶液：准确称取提土霉素、四环素、金霉素各 10mg，用甲醇 溶剂，并定容至 100ml 容量瓶中。 土霉素、四环素、金霉素混合标准工作溶液：采用流动相将土霉素、四环素、金霉素混合标准储备溶 液稀释成浓度为 0.2 mg /L、0.4 mg /L、2.0 mg /L、4.0ng/L 、8.0mg/L 不同浓度的混合标准工作曲线。 固相萃取柱：LabTech PLS 150mg 6mL 甲醇（AR. ） 草酸（AR. ） 纯净水 1.2 样品处理 1.2.1 样品提取 将 20mL 牛奶和 20mL Mcllvaine 缓冲液加入 50mL 塑料离心管中；将样品涡旋混合 2 min，4000 rpm 以上离心 10 min；取 20mL 上清液，待净化。 1.2.2 样品净化 SPE 柱：LabTech PLS 150mg/mL 图 1 牛奶中四环素测定 SPE 方法在 SPE800 软件中的设定 将洗脱液在 40℃减压浓缩至近干，然后用流动相重新定容至 1mL，待测。 1.3 色谱条件 检测波长：350nm 色谱柱：Labtech C18 （18 150×4.6mm，5μm） 柱温：30℃ 流动相：乙腈+ 甲醇+0.01mol/L 草酸溶液（2+1+7 ） 流速：0.5 mL/min 进样量：20 uL mV 40 36 素 霉 素