第十六章质谱仪技术于蛋白质体分析之应用mass spectrometry in .pdf

第十六章 質譜儀技術於蛋白質體分析之應用 Mass Spectrometry in Proteome Analysis 蔡有光 永進生物科技股份有限公司 研發部 主任 一、前言 (1-3) 蛋白質體學（proteomics ）是一門用來研究一群蛋白質的科學與技術 。其目的是希望 能針對某代謝路徑、細胞胞器、細胞、組織、器官甚至整個生物體，藉由了解其中所有蛋白 質（蛋白質體）之某些特性，研究他們在不同生理與疾病狀態下的整體變化。目前研究的蛋 白質體特性，則包括了種類與數量、後轉譯修飾（post-translational modification ）、在細胞 胞器間的運動與分布、蛋白質間的交互作用等等。質譜儀技術（mass spectrometry ）探討的 則是如何將分子離子化，而能根據其質荷比（mass-to-charge ratio 或m/z ）作分離並測量各 自的數量。為達成這個功能，質譜儀通常包括三個部份：離子源 （ion source ）、質量分析器 （mass analyzer ）以及離子偵測器（detector ）。 二、質譜儀技術與蛋白質體分析 在 1990 年代以前，質譜儀在離子源設計上兩種技術的突破，對蛋白質的分析產生了革 (4) ，一是基質輔 命性的影響。一是電噴灑離子化技術（electrospray ionization 或簡稱 ESI ） (5) 助雷射脫附離子化（matrix-assisted laser desorption / ionization 或簡稱MALDI ） 。電噴 灑離子化的離子源由於適合用於在溶液中的樣本，因此可以直接串聯以液相層析法（liquid chromatography ）或電泳法（electrophoresis ）為原理的儀器。如現在常用液相層析儀－質 譜儀術（liquid chromatography-mass spectrometry 或簡稱LC/MS ），就是用電噴灑離子化 技術，把液相層析儀和質譜儀連接起來，這樣的設計也大大提高了質譜儀的工作能力。此外， 因為產生多電荷的離子而使其質荷比降低，非常適合串接測量範圍小的質量分析器，如四級 棒（quadrupole ）、離子井（ion trap ）等，用以分析分子量較高的胜 與蛋白質。 而基質輔助雷射脫附離子化的離子源，則常與飛行時間（time-of-flight 或簡稱 TOF ）質 量分析器串接，在使用上較為簡單、靈敏而效率高。由於主要產生單電荷的離子，質譜的判 讀也相對簡單許多。這兩個技術不但能有效使胜 與蛋白質一類的分子離子化，同時也維持 233 分析物原有的結構，因此使得質譜儀成為分析蛋白質與胜 的最佳工具。質譜儀目前主要用 於研究蛋白質的初級結構（primary structure ）問題，如蛋白質身份鑑定（protein identification ） 與後轉譯修飾基（post-translational modification ）等。此外，也被應用於其他的蛋白質結構 問題，如複合體形成、蛋白質折疊（protein folding ）等，實為蛋白質體研究上的重要工具， 但這部份將不在此章節中作討論。 三、質譜儀簡介 1. 質譜儀的基本結構 質譜儀主要包括三個部分（如圖一）：離子源、質量分析器、以及離子偵測器。離子源 將分析物氣化及離子化，導入質量分析器，在這裡各種離子會依m/z 值作分離而依序離開， 經離子偵測器將離子數多寡轉成電子訊號的強弱。以下詳細說明各部分之功能與原理： 圖一、質譜儀的基本結構 （a ）離子源 （ion source ）：離子源的作用，在於如何將固體或液體的樣本轉化成氣態 離子。正如