hissep ni-nta agarose resin his 标签蛋白琼脂糖纯化树脂.pdf

上海翊圣生物科技有限公司 客服热线：4006-111-883 E-mail: order@ HisSep Ni-NTA Agarose Resin His 标签蛋白琼脂糖纯化树脂 产品信息 产品名称 产品编号 规格 储存 HisSep Ni-NTA Agarose Resin （His 标签蛋白琼脂糖纯化树脂） 20502ES10 10ml 4 ℃ HisSep Ni-NTA Agarose Resin （His 标签蛋白琼脂糖纯化树脂） 20502ES50 50ml 4 ℃ HisSep Ni-NTA Agarose Resin （His 标签蛋白琼脂糖纯化树脂） 20502ES60 100ml 4 ℃ 产品描述 HisSep Ni-NTA Agarose Resin 以高度交联的4%琼脂糖凝胶为基质，通过化学方法偶联四配位的氮川三乙酸（NTA ） 为配体，螯合镍离子（Ni2+ ）后，形成非常稳定的八面体结构，镍离子处于八面体的中心，这样的结构可保护镍离子免受小 分子的进攻，与Ni-IDA 树脂相比，更加稳定，可以耐受一定浓度的还原剂、变性剂或耦合剂等苛刻条件。已经成为实验室 纯化His 标签蛋白不可获取的树脂之一。 产品性质 基质（Matrix ） 高度交联的4%琼脂糖凝胶 粒径 （Bead size ） 45-165µm 载量 （Capacity ） ＞40mg 6×His-tagged protein/ml 基质 耐压（Tolerance Pressuremax ） 0. 1MPa, 1bar 储存缓冲液 （Buffer ） 含20% 乙醇的1×PBS 运输和保存方法 冰袋运输。4 ℃保存。有效期2 年。 注意事项 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 使用方法 （一）纯化流程 1 缓冲液的准备 缓冲液使用原理：低咪唑上样，高咪唑洗脱，或者高pH 上样，低pH 洗脱。Buffer 在使用前最好用0.22µm 或0.45µm 滤膜 过滤除菌。可溶性组氨酸标签蛋白纯化所需配方详见附表1。包涵体组氨酸标签蛋白纯化所需缓冲液及配方详见附表2 。 2 样品准备 2.1 细菌表达的蛋白 （本说明以细菌表达的蛋白纯化为例） 1）挑取单菌落到含有适合抗性的LB 培养基中，根据载体说明加入相应的诱导剂诱导相应的时间。 2 ）表达结束后，将培养液转至离心瓶，7000rpm，离心 15min，收集菌体，然后加入 1/10 体积的裂解液（Lysis buffer ）和 PMSF （PMSF 在破碎前加入，其终浓度为 1mM），同时也可加入其他蛋白酶抑制剂，但不能影响目的蛋白与树脂的结合。 3 ）之后加入溶菌酶，使其工作浓度为1mg/ml 。【注】：如果表达的宿主细胞内含pLysS 或pLysE ，可以不加入溶菌酶。 4 ）将菌体沉淀悬浮起来（如果菌液浓度高，可考虑加入10µg/ml RNase A 和5µg/ml DNase I），混匀，置于冰上超声破碎细 胞，至菌液基本保持澄清。 5 ）收集上述澄清蛋白液，10000rpm，4 ℃离心20-30min 。取上清0.22µm 或0.45µm 滤膜过滤后置于冰上备用或-20 ℃保存。 网址： 第1 页，第5 页 上海翊圣生物科技有限公司 客服热