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hissep ni-nta agarose resin his 标签蛋白琼脂糖纯化树脂
上海翊圣生物科技有限公司
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HisSep Ni-NTA Agarose Resin
His 标签蛋白琼脂糖纯化树脂
产品信息
产品名称 产品编号 规格 储存
HisSep Ni-NTA Agarose Resin (His 标签蛋白琼脂糖纯化树脂) 20502ES10 10ml 4 ℃
HisSep Ni-NTA Agarose Resin (His 标签蛋白琼脂糖纯化树脂) 20502ES50 50ml 4 ℃
HisSep Ni-NTA Agarose Resin (His 标签蛋白琼脂糖纯化树脂) 20502ES60 100ml 4 ℃
产品描述
HisSep Ni-NTA Agarose Resin 以高度交联的4%琼脂糖凝胶为基质,通过化学方法偶联四配位的氮川三乙酸(NTA )
为配体,螯合镍离子(Ni2+ )后,形成非常稳定的八面体结构,镍离子处于八面体的中心,这样的结构可保护镍离子免受小
分子的进攻,与Ni-IDA 树脂相比,更加稳定,可以耐受一定浓度的还原剂、变性剂或耦合剂等苛刻条件。已经成为实验室
纯化His 标签蛋白不可获取的树脂之一。
产品性质
基质(Matrix ) 高度交联的4%琼脂糖凝胶
粒径 (Bead size ) 45-165µm
载量 (Capacity ) >40mg 6×His-tagged protein/ml 基质
耐压(Tolerance Pressuremax ) 0. 1MPa, 1bar
储存缓冲液 (Buffer ) 含20% 乙醇的1×PBS
运输和保存方法
冰袋运输。4 ℃保存。有效期2 年。
注意事项
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法
(一)纯化流程
1 缓冲液的准备
缓冲液使用原理:低咪唑上样,高咪唑洗脱,或者高pH 上样,低pH 洗脱。Buffer 在使用前最好用0.22µm 或0.45µm 滤膜
过滤除菌。可溶性组氨酸标签蛋白纯化所需配方详见附表1。包涵体组氨酸标签蛋白纯化所需缓冲液及配方详见附表2 。
2 样品准备
2.1 细菌表达的蛋白 (本说明以细菌表达的蛋白纯化为例)
1)挑取单菌落到含有适合抗性的LB 培养基中,根据载体说明加入相应的诱导剂诱导相应的时间。
2 )表达结束后,将培养液转至离心瓶,7000rpm,离心 15min,收集菌体,然后加入 1/10 体积的裂解液(Lysis buffer )和
PMSF (PMSF 在破碎前加入,其终浓度为 1mM),同时也可加入其他蛋白酶抑制剂,但不能影响目的蛋白与树脂的结合。
3 )之后加入溶菌酶,使其工作浓度为1mg/ml 。【注】:如果表达的宿主细胞内含pLysS 或pLysE ,可以不加入溶菌酶。
4 )将菌体沉淀悬浮起来(如果菌液浓度高,可考虑加入10µg/ml RNase A 和5µg/ml DNase I),混匀,置于冰上超声破碎细
胞,至菌液基本保持澄清。
5 )收集上述澄清蛋白液,10000rpm,4 ℃离心20-30min 。取上清0.22µm 或0.45µm 滤膜过滤后置于冰上备用或-20 ℃保存。
网址: 第1 页,第5 页
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