人骨肉瘤细胞株中骨形态发生蛋白- 1 的检测、克隆 - 中国病理生理杂志.pdf

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2017-09-02 发布于天津
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人骨肉瘤细胞株中骨形态发生蛋白- 1 的检测、克隆 - 中国病理生理杂志

Chinese Journal of Pathophysiology 2003, 19( 6) : 751- 756 ∃ 751 ∃ [ ] 1000- 4718(2003)06- 0751- 06 - 1 * 1 1 2 1 陈冬瑛 , 朱全胜 , 刘超 , 丘钜世 1 2 ( , 510089; DNA , 510000) [ ] :- 1, BMP- 1 :BMP- 1, Saos- 2RNA, RT- PCR pMAL c2 , BMP- 1(322- 588aa) - pMAL c2DH5- , ,DNA IPTG: BMP- 1 pMALc2, IPTG ,( 66- 72)%: BMP- 1(2CUB 1 EGF ), BMP- 1 ,BMP- 1BMP- 1 [] ; ; [] R363 [] A - 1(bone morphogenetic protein- - , 1, BMP- 1) pMAL c2 / Dr. Seth J. Corey DMEM(Gibco- BRL, Grand ( extracellular matrix, ECM) Island, NY, USA), ( ), RNeasy , MiniKit(Qiagen),First cDNA Strand Synthesis Kit(Fer [2- 9, 14] BMP- 1 manta), dNTPMix Taq ( ), DNA T4 [ 2, 3, 15] , BMP- 1TGF- (Promega), ( ) [ 9, 10, 14] PCR 2 2.1 细胞培养和总RNA 的提取 BMP- 1, Saos- 2 U2- OS DMEM, BMP- 1; 4 (Saos- 2 20%, U2- OS 10%)10 10 U/L BMP- 1 4 10 10 U/L , 37! ,BMP- 1 6 5% 10 , ,RNeasy MiniKit RNA pMAL c2, 22 引物设计和RT- PCR BMP- 1 ( 1)Primer Primere50 BMP- 1: 5∀- GCT # CTAGAT GTGGAGAGACCCTGCAAGACA- 3∀, BMP- 1 1 : 5∀- CCCA # AGCTTACTCACAGCGGCGCTTGTC- Saos- 2U2- OS DH5 3∀Xba I Hind III [] 2002- 03- 15 [ ] 2002- 08- 06 , PCR * []