通过设计解决关于多肽的一些问题 - 赛百盛.pdf

多肽是由复杂分子组成的化合物，每一条序列都有其独特的化学和物理属 性。除了有些多肽难于合成，大多数多肽相对容易合成，但是纯化可能较困难。 很多肽水溶性较差，因此在纯化时，这些疏水性多肽常常需要溶解在有机溶剂或 者特定的缓冲溶液中。这些有机溶剂或者缓冲溶液有时并不适合生物学等方面的 实验，所以客户就不能用这些多肽进行研究工作。 因此，当接到多肽的订单时，我们会对这些多肽序列进行分析，以确定是否 难以合成或水溶性的问题。针对一些有着特殊序列的多肽，我们多肽专业人员经 过仔细地分析研究后，会给客户提出合理的建议。例如，当遇到难于合成或水溶 性差的多肽序列时，我们不会拒绝合成，而是提供客户一些可以改善的方法，最 终使客户得到满意的产品。这些方法包括改变序列或其两端等方面。我们根据常 见氨基酸的特性来进行分类，详见后面的附表。接下来我们列出多肽问题的类型 及减少或克服问题的方法，以供客户参考。只有通过和赛百盛工作人员沟通协商 后，这些特殊多肽的设计方案才能最终确定。 1. 一般来讲，肽链长度越长，所得到粗肽的纯度越低。大多数含有少于15 个 残基的多肽比较容易合成。然而，当肽链的长度超过20 个残基时，就应该考虑 如何才能得到目的肽。多数情况下，缩短肽的长度使其少于20 个残基，能够达 到理想的结果。 2. 如果序列中含有较多的疏水性残基，尤其分布在距离羧基端7-12 位置时， 多肽就会难于合成。这可能是在合成过程中，由于多肽侧链形成β折叠造成不完 全耦合所导致。这种情况下，用一些极性残基来替换一个或多个疏水性残基，也 可以插入一个Gly或Pro，就可以打开β折叠。 3. ” 如果序列中含有较多 Cys、Met、Arg 、Trp 残基时，多肽就会难于合成。 因为 Cys、Met、Trp 或者其侧链很容易氧化。如果可能的话应尽量避免这些残 基在序列中出现，或者做一些保守的替换。例如，用 Ser 代替 Cys，Norleucine 代替 Met，Lys 代替 Arg ，而 Tyr 、Phe 或其他一些疏水性残基如 Leu 可用来代 替 Trp 。 1. N C 对酸性肽（即在中性条件下多肽带负电荷），我们推荐多肽为这样的形式： Acetyl-peptide-COOH （多肽N 端乙酰化，C 端自由羧基），以使多肽尽可 能多的带负电荷。 对碱性肽（即在中性条件下多肽带正电荷），我们推荐多肽为这样的形式： H-peptide-amide （多肽N 端自由氨基，C 端酰胺化），以使多肽尽可能多 的带正电荷。 2. 如果序列中疏水性残基（W 、F、V 、I、L、M、Y 、A ）的含量大于50%时， 多肽的溶解性显著降低。此时，延长序列增加的极性残基往往有助于提高多肽 极性。相反，缩短序列以减少疏水性残基也能增强多肽的极性。总之，多肽的极 性越强，其水溶性越好。 3. 为了改善多肽的溶解性，有些多肽序列是可以任意添加一些极性残基的。我 们建议，在酸性肽 N 或 C 端加入 Glu-Glu，在碱性肽 N 或 C 端加入 Lys-Lys。 如果序列中不允许加入带电基团，我们建议在序列 N 或 C 加入 Ser- Gly-Ser 。 显然，如果多肽序列两端都不允许改变的话，这种方法就不适合了。 4. 改变序列中的某些残基就可以改善多肽的溶解性。一个相对保守又简单 的替换能够显著地增强多肽的溶解性，如用 Gly 代替 Ala 。 5. 如果想要合成一些连续的或重叠的多肽，应当对每一条多肽的起始点进 行适当的改变，使每条多肽序列中的疏水性和亲水性残基达到平衡。或者把 “困难”残基分配到不同的序列中（如，将两个Cys 划分到两个序列中，而 不要使其出现在在同一个序列里）。 根据氨基酸不同特性，可以将20 种氨基酸及其它一些常见氨基酸分为不同 的种类。下面列出一些常见的分类方法： 1. 20 A Ala - Alanine M Met - Methionine C Cys - Cysteine N Asn - Asparagine D Asp - Aspartic acid