应用led 电筒对小鼠体内萤光肿瘤的简易整体成像 - anticancer, inc.pdf

Bio-Techniques, 39(2), 170-171(2005) 应用LED 电筒对小鼠体内萤光肿瘤的简易整体成像技术 1 2 1 1 Meng Yang , George Luiken , Eugene Baranov , and Robert Hoffman 1 2 AntiCancer, Inc. San Diego, and Fluoro-Probe, Inc.,Coronado, CA, USA 我们实验室已经率先建立了用绿色萤光蛋白(GFP)在体内发现细胞并使之可视 化的方法。这一萤光工具首次使得显微镜下才能观察到的肿瘤细胞能够在活体宿 主的器官上被发现并可视化 1。 使用GFP的整体成像技术也是我们实验室建立的 2 。各种萤光肿瘤在小鼠体内 的生长和转移可以实时地被成像。基于 GFP 的整体成象是非侵袭性的外部成像技 术。 这一技术对在完整的动物体内生长的恶性肿瘤提供了前所未有的连续性的可 视监视。而且不必注射底物和使用麻醉。对生长在内脏器官上的肿瘤的定量测量 由数码化的整体影像来确定。成像由萤光透视显微镜或萤光暗箱和 CCD 相机来完 成 2 。 最近Tyas等用兰色LED电筒对GFP转基因鼠进行基因表现型的分类。这些小 鼠的大多数组织表达高水平的绿色萤光蛋白。Tyas 和他的同事用发兰光的 LED 电 筒去激发活体动物上的绿色萤光蛋白并通过适当的滤光片来观察识别 GFP 阳性的 转基因幼鼠 3 。 我们在此报道使用兰色LED手电筒附加D470/40滤光片(Chroma, USA)作为激 发光，并用能透过波长高于 515nm 光线的滤光片进行观察，能够将生长在小鼠体 内器官上表达GFP或 RFP（红色萤光蛋白）的肿瘤在活体小鼠整体成像2 。 图 1A显示种植在小鼠脑内的两个肿瘤的整体影像。其中一个表达绿色萤光蛋 白，另一个表达红色萤光蛋白。影像显示表达绿色和红色萤光蛋白的肿瘤的萤光 可以同时被安装了 D470/40 滤光片的兰色 LED 手电筒的光源所激发并被成像。图 1B 显示了使用兰色 LED 手电筒光源作为激发光将种植在骨头里的表达绿色萤光蛋 白的肿瘤整体成像。 图2A显示了使用兰色LED手电筒光源作为激发光将种植在结肠上的表达绿色 萤光蛋白的肿瘤整体成像。整体成像以后，实验动物的腹腔被打开，并且在同样 的位置上用同样的方法直接成像（图 2B）。通过图 2A 和图 2B 的比较说明了图 2A 中整体影像的高度正确性。 1 Bio-Techniques, 39(2), 170-171(2005) 图2C显示了种植在同一小鼠体内肝脏上的红色萤光蛋白肿瘤和胰脏上绿色萤 光蛋白肿瘤的图像。如同图 1 所示的表达红色或绿色萤光蛋白的颅内种植肿瘤， 种植在肝脏上的 RFP 肿瘤和胰脏上 GFP 肿瘤均可同时被用兰色 LED 手电筒的光源 所激发。图 2D显示了种植在胰脏上表达红色萤光蛋白肿瘤的影像。 影像是用 Hamamatsu C5810CCD three-chip cooled color CCD 相机, (Hamamatsu Photonics, Hamamatsu City, Japan)拍摄的。然而，用更为简单的 数码相机也能获得可以接受的效果。图 1 和图 2 所显示的影像肉眼可以很容易地 看清。不需要麻醉，注射底物或限制动物活动。萤光影像的像素数量和强度可用 计算机软件转换为萤光强度并以平方毫米为单位计算肿瘤的面积（表1）。 萤光强度是所有可检测的 GFP 信号的平均值。它由 CCD 相机绿色信号频道的 “智力计算”所定义的相对单位所定。极限值为肉眼能够辨认的高於背景的自发 萤光的强度。表2将结肠肿瘤的整体影像和直接影像的大小及萤光强度做了对比。 从表 2 可以看出直接影像和整体影像的大小是可以相比拟的。更为引人注目的是 整体影像的萤光强度约为直接影像的百分之七十。尽管在整体影像成像过程中由 于光线的散射导致某些信息的丢失，但用如此简单的设备仍可获得成像所需的足 够的信