用同源重组法修饰含人!类珠蛋白基因簇的细菌人工染色体.pdf

遗 传 （ ） （）： ， 研究报告 .E$E+5W ’/ )%I I= @A A !?C ^ !B ! @ ! ] G 用同源重组法修饰含人 类珠蛋白 ! 基因簇的细菌人工染色体 冯东晓，刘德培，黄 粤，梁植权 （中国医学科学院基础医学研究所 中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室，北京 !# ） 摘 要：采用 蛋白介导的同源重组的方法，对本实验室筛选出的包含完整人 类珠蛋白基因簇的细菌人工 $% ’ ( ! 染色体（ ） 进行删除修饰。首先采用 的方法，分别在预删除的 增强子区域的上游和下游克隆 )’* +,’ -*$ ./ 0 1 长度约为 的两段同源序列，并一起克隆到构建载体 的 和 位点上， 酶切后回收 左 #23 3)4 ! # 5 $ % 6555 ’#( 5 !72 右的片段并克隆到温度敏感的穿梭质粒 /4 0 $%’ 中，转化带有人 类珠蛋白基因簇的 的感受态大肠 3 ( )’* +,’ ! 杆菌+.!)，经氯霉素正筛选和镰孢菌酸的负筛选，获得发生两次同源重组后只含 )’* +,’ 而穿梭载体已丢失 的菌株，经/89:;%= 杂交鉴定，获得了./ 0 1 被定位删除的)’* 突变体克隆。表明同源重组的方法可以对含有 较多重复序列的)’* +,’ 进行准确的删除修饰。 关键词：细菌人工染色体；同源重组；0 珠蛋白 ! 中图分类号： 文献标识码： 文章编号： （ ） ?!@ ’ @#A 0 BCC@ @ ! A 0 !?C 0 # !# $%’(’)*+’%, %( * -*)+#.’*/ 0.+’(’)*/ 1.%2%3%2# 1%,+*’,’,4 562*, 7 /%8’, 9#,# 1/63+#. 8 5%2%/% %63 ;#)%28’,*+’%, !4 : 4 ， ， ，