mf015-plus-2x m5 ultrasybr mixture (low rox) - 北京聚合美生物 .doc

2X M5 UltraSYBR Mixture (Low ROX) 使用说明书 产品名称 单位 货号 2X M5 UltraSYBR Mixture (Low ROX) 1ml*5支 MF015-plus-01 2X M5 UltraSYBR Mixture (Low ROX) (1ml*5支)×5 MF015-plus-05 2X M5 UltraSYBR Mixture (Low ROX) (1ml*5支)×10 MF015-plus-10 【储存条件】 长期保存，请置于-20?C，有效期24个月。经常使用，可置于4?C保存至少六个月。 【产品简介】 2x M5 UltraSYBR Mixture（Low ROX）是专用于染料法（SYBR Green I）实时荧光定量PCR的预混体系，浓度为2×，包含 GoldStar Taq DNA Polymerase、PCR Buffer、dNTPs、SYBR Green I 荧光染料和Mg2+和Low ROX校正染料，操作简单方便。主要用于基因组DNA靶序列和RNA反转录后cDNA靶序列的检测。 　　本品所含的荧光染料SYBR Green I可以与所有的双链DNA结合，使该产品可用于不同靶序列的检测而不需合成特异性标记探针。本品含有的GoldStar Taq DNA Polymerase是一种经化学修饰的、全新高效热启动酶，在常温下没有聚合酶活性，有效避免在常温条件下由引物和模板非特异性结合或引物二聚体而产生的非特异性扩增，酶的激活须在95℃下孵育10分钟。独特的PCR缓冲体系与热启动酶的组合，有效抑制了非特异性的PCR扩增，显著提高了PCR的扩增效率。 　　所含的ROX染料可校正定量PCR仪孔与孔之间产生的荧光信号误差，本试剂盒中ROX校正染料含量较低，适用于ABI Prism7500/7500 Fast，Stratagene Mx3000/Mx3005P，Corbett Rotor Gene 3000等需要较低ROX信号校正的荧光定量PCR仪。 【产品组份】 化学修饰热启动Taq DNA Polymerase、SYBR Green I、dNTPs、Mg2+、ROX、反应缓冲液、稳定剂和增强剂。 【适用范围】 1．本产品中使用了全新高效热启动酶GoldStar Taq DNA Polymerase与独特的PCR缓冲体系，显著提高PCR的扩增效率，具有高灵敏度和特异性强的特点。 2．适用于荧光定量PCR检测，能够准确地对目的基因进行定量和检测。主要用于基因组DNA靶序列和RNA反转录后cDNA靶序列的定量检测。 【所需试剂】 本产品为2×预混荧光定量PCR反应体系，使用时只需加入模板、引物和水，使其工作浓度为1×,即可进行反应。具有快速简便、灵敏度高、特异性强、稳定性好等优点，可最大限度地减少人为误差、节约PCR实验操作时间、降低污染几率。 【操作示例】 按下表配制PCR反应体系: Template DNA 2* μl 2×M5 UltraSYBR Mixture 25 μl Primer 1 (10μM) 1 μl Primer 2 (10μM) 1 μl ddH2O补足至 50 μl 建议的PCR条件：（两步法和三步法都可以） 95°C 10min. 35-40 cycles of: 95°C 15 sec. 55–65°C 15 sec. 72°C 30-60 sec**. 溶解曲线分析按正常程序进行 *:10~100 ng基因组 DNA ，或1~10 ng cDNA为参照 ，因不同物种的模板中含有的目的基因拷贝数不同，可对模板进行梯度稀释，以确定最佳的模板使用量。以two Step RT PCR反应的 cDNA （RT 反应液）作为模板时的添加量要超过PCR反应液总体积的10% 。 **1）本产品所采用的热启动酶须在预变性95℃、10 min条件下实现酶的活化。 2）退火温度请以60-64℃作为设定范围的参考，发生非特异性反应时，可提高退火温度。 3）本程序是以ABI 7500荧光定量PCR仪为参照设定，融解曲线分析请以所使用的荧光定量PCR仪推荐的程序进行设定。 【反应条件优化】 在荧光定量反应条件优化时，应从引物浓度、退火温度、延伸时间等方面进行考虑，以提高反应特异性和扩增效率。 1．反应特异性和扩增效率高的实验体系应具备以下条件： 1）反应特异性高：阴性对照无引物二聚体等非特异性扩