抗Dsg-3单链抗体在寻常型天疱疮鼠模型中的作用分析.pdfVIP

抗Dsg．3单链抗体在寻常型天疱疮鼠模型中的作用研究 中文摘要 vulgaris，PV)是一危及生命的自身免疫性大疱性皮 寻常型天疱疮(pemphigus 肤与粘膜疾病，是所有类型天疱疮中发病率和死亡率最高的一种，其临床特点为 皮肤和粘膜出现松弛的水疱和糜烂面，病理上主要表现为棘层松解和表皮内裂 3，Dsg．3)的自身抗体在 隙。目前多数学者认为针对桥粒芯糖蛋．3(Desmoglein 寻常型天疱疮的发病中起最主要的作用，但这个自身抗体的具体作用机制目前尚 不明了。目前寻常型天疱疮的治疗以糖皮质激素和其它免疫抑制剂为主，尽管这 些治疗能使症状缓解，但其副作用不可忽视。现在，天疱疮患者往往不再死于疾 病本身，而是死于糖皮质激素等免疫抑制剂引起的副反应。因此，进一步探讨天 疱疮的发病机制，寻找更为安全有效的治疗手段是十分必要的。 尽管国内外已有多项研究证明针对Dsg．3的抗体具有致病性，也有研究证实 寻常型天疱疮患者血清中免疫球蛋白的Fab’片段也具有致病性，但针对Dsg．3的 比Fab’片段更小的抗原结合单位是否还具有致病性，国内外都没有类似研究。我 们已制备了Dsg一3中ECl．2和EC3．4两个片段的融合蛋白，并通过免疫家兔获 得针对ECl．2，EC3．4的抗血清，在Balb／c新生鼠上验证了它们的致病性。我们 EC3—4片段，但它是否还具有致病性目前尚无研究证实。本研究的目的是在Balb／c 新生鼠上研究针对EC3．4的ScFv的致病性和这种ScFv对天疱疮鼠模型的影响， 以进一步探讨天疱疮的发病机制，寻找可能的干预治疗手段。 EC3—4片段的ScFv被动转移至Balb／c新生鼠， 本研究的第一部分将抗Dsg一3 从临床表现、免疫荧光和组织病理几个方面评价这种SeFv的致病性，并与寻常 型天疱疮患者的血清比较。第二部分是观察在不同时间点给Balb／c新生鼠注射 抗Dsg一3 EC3—4片段的ScFv是否能减弱寻常型天疱疮患者血清的致病性。我们 将15只Balb／c新生鼠随机分为5组，第一组Balb／c新生鼠只在皮下注射生理盐 水作为阴性对照；第二组Balb／c新生鼠先皮下注射生理盐水，-d,时后皮下注 射寻常型天疱疮患者血清；第三组Balb／c新生鼠先皮下注射ScFv，--d,时后皮 下注射寻常型天疱疮患者血清；第四组Balb／c新生鼠同时在不同部位皮下注射 ScFv和寻常型天疱疮患者血清：第五组Balb／c新生鼠先皮下注射寻常型天疱疮 患者血清，三小时后皮下注射ScFv。全部Balb／c新生鼠均于注射血清24小时 后观察}陆床表现，处死，取皮肤迸彳亍直接免疫荧光裣查和常规病理检查。 实验结果显示，注射寻常型天疱疮患者的血清可以使Balb／c新生鼠出现寻 EC3—4片段的ScFv无法在Balb／c新生 常型天疱疮样改变，而单纯注射抗Dsg．3 EC3—4片 鼠中诱导出类似于人寻常型天疱疮的改变；不管在何时注射，抗Dsg一3 段的ScFv都不能减弱寻常型天疱疮患者血清对Balb／c新生鼠的致病性。 由此得出以下结论： 1．单纯针对Dsg一3 抗体中除抗原结合片段以外的结构对于维持天疱疮抗体的致病性是必须的。 2．单纯针对Dsg-3 EC3—4片段的ScFv并不能阻断寻常型天疱疮患者血清 的致病性，即此ScFv对天疱疮鼠无保护作用。 [关键词】寻常型天疱疮，单链抗体，致病性，鼠模型 of Chain Variable of TheEffect Fragments Single AntibodyRegion Model