树突状细胞诱导曲菌特异的Th免疫及皮质类固醇对其影响的分析.pdfVIP

中文摘要 中文摘要 【茸的】侵袭性肺曲菌病蹩免疫受损宿主常见虽严重的疾病之一。应用皮质类固 醇治疗的患者特别易患此病。研究证实T淋巴细胞介导的免疫t阪应在抗妯菌免 疫中起着非常重簧的作用。但对树突状细胞(Dendritic cells，DC)这一在T细骢 免疫反应的起始朔调节中起重要作用的细胞，在抗曲菌免疫中的作用了解较少， 丽对皮餍类蘑醇如何在DC东平彩嘀梳舔的抗曲蔼免疫了解更少。本文圭簧研究 DC对曲菌孢子的吞噬能力、DC受孢子刺激后分泌细胞因子IL．12和IFN-’,、DC 褒体内诱导静穗菌特异的Thl免疫敬教皮震蹙霜酵氢纯可静橙 主抗蓝蔫免疫的税割，蔽及疫矮炎嚣醇滚疗靛患纛易患IPA懿秘潮，秀笈浸薪懿 预防和治疗IPA的方法提供实验赫础。【方法】(1)小鼠骨髓DC的培养及鉴定： 歇枣鬣强鸶；}羹黢费中取爨雷髓缀魏，蔼筑缨魏裂瓣渡裂瓣其孛缎缨蕤，燕入含 中培养，涎天盖移弃悬浮维您，羹按瑟壤棼基彝绥蕤嚣予，缝续壤券三天繇霹彀 获悬浮之成熟DC。电镜下形态观察搽定DC。(2)加热灭活烟曲菌孢予 (Aspergillusfumigatus 主要用l旷M。在6、12、24、48小对取出培养液，经低速离心馊DC-F沉，含 有未被吞噬的游离孢子的上清在紫外线分光光度仪550nm处测OD值，通过麦 氏比浊标准计算游离孢予浓度。(4)DC受Afc刺激后分泌细胞因子的检测：实 Aft刺激的DC j鼙小鼠体内诱导的Th免疫：实验分5组，分别给小鼠接种经Afc Afc+HC刺激后24小时，低速离心去除胞外游离孢子，PBS洗三兰遍，将DC配 小鼠。每组做3例。每周接种一次，共两次。最聪一次接种后7天，用尼龙棉柱 浚分离夺蔑障毽攀绥穗。T细麓夜俸穸}臻受Afc涮激，并淤少羹DC终为撬原呈 中文摘要 学统计软件，变量以平均数±标准差(SD)表示，组间比较采用t检验，组内比 较采用Dunnett’S方差分析。【结果】(1)小鼠DC在体外能够吞噬加热灭活的烟 曲菌孢子，在开始24小时DC吞噬活性较强，其吞噬率在24小时后达饱和状态 状态(91．36：￡0．46％)，DC吞噬曲菌孢子的功能没有被影响；预先48小时加入 率明显下降，统计学差异有显著性，p0．001。预先加入不同浓度的HC时，则 随浓度的增加24h吞噬率也下降，但在HC为lO‘5M时吞噬率下降显示明显。(2) DC受曲菌孢子刺激后有IL—12和IFN吖分泌，24小时分别为113．07+6．79 pg／ml、 以后上升平缓，IL．12和IFN-y各时间点分泌量与对照组(未加Ale)同时期相比， 明显减少。各时间点与对照组(未加HC)相比统计学差异均有显著性，p0．001。 DC受曲菌孢子刺激后与对照组相比无IL一10分泌，p0．05。而当同时加入HC 时各时间点IL—10分泌没有受到影响，p0．05。(3)给小鼠接种经灭活曲菌孢子 刺激的DC后，脾脏T细胞在体外受曲菌孢子刺激后与对照组相比分泌较多IFN-7 计学差异有显著性，p0．001，但IL．10的分泌增加，与前组相比差异有统计学意 义，p0．05。给小鼠接种曲菌孢子后，其脾脏T细胞分泌IFN-7与其它各组相比 计学意义。【结论】(1)体外培养的DC能够高效吞噬加热灭活的烟曲菌孢子。 DC可能是抗曲菌免疫的效应细胞。HC抑制DC吞噬曲菌孢子，这种抑制作用 需要一定的时间才能发挥，抑制作用随HC浓度的增加而增强，HC的抑制作用 在lO。5M时显示明显。(2)体外培养的DC受加热灭活曲菌孢子刺激后被激活， 不影响IL．10的产生，因此抑制DC获得的Thl极化能力。(3)经加热灭活的曲 菌孢子刺激的DC在小鼠体内能与脾脏T细胞相互作用，诱导脾脏T细胞分化 为曲菌特异的分泌IFN．Y的Thl细胞。经曲菌孢子和HC同时刺激的DC在小鼠 体内也与脾脏T细胞相互作用，诱导脾脏T细胞分泌IFN-y明显减少，而IL．10 却增加，促进脾脏T细胞向曲菌特异的Th2细胞分化。加热灭活的曲菌孢子在 小鼠体内诱导脾脏T细胞分化为曲菌特异的Thl