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水通道蛋白在呼吸道上皮细胞中的表达分析
内容摘要
子通道。从哺乳动物组织克隆鉴定的水通道蛋白已有10种,分别命名为AQPo.AQP9,
四种水通道蛋白表达并参加肺液体转运。其中,AQPl主要分布于支气管周围血管床和
脏层胸膜淋巴管和肺泡毛细血管内皮,而肺泡上皮细胞上较少,AQP3分布于大气道上
皮细胞基底侧细胞膜,肺泡II型上皮细胞,AQP4分布于整个气道上皮细胞基底侧细胞
膜,AQP5表达在肺泡I型上皮细胞。研究发现粘膜下层腺体管腔侧细胞膜上有丰富的
法发现支气管柱状上皮细胞管腔侧细胞膜上也有AQP5表达。唾液腺腺泡细胞膜上有
等研究再次表明AQP。和AQP5定位于小鼠鼻咽部和上呼吸道粘膜下腺浆液性上皮细胞
的基底侧面和内膜面,测定AQP4和AQP5基因敲出小鼠粘膜下腺的液体分泌量和成分,
表明AQP;在鼻咽部和上呼吸道粘膜下腺液体分泌中有重要作用。以上资料均提示AQP
可能参与下呼吸道粘液腺的水转运与粘液分泌调节。但是AQP在呼吸道粘膜上皮细胞
中的表达及其生理功能,特别是糖皮质激素和氨溴索等药物对AQP的调节作用,尚不
明确,有待进一步的研究。为此,本研究拟从AQP入手,采用人呼吸道上皮细胞培养,
以及用盐酸氨溴索和地塞米松干预后,观察水通道蛋白表达对呼吸道粘液分泌的影响,
为I临床治疗提供参考意见。
【方法】通过免疫组织化学、Western
time
PCR)检测AQP3和AQP5表达。
定量PCR(real
表达AQPl和AQP4蛋白;Western
mRNA,与Western
细胞表达AQP3和AQP5mRNA,而不表达AQPl和AQP4
blotting
time
结果一致。定量PCR(real
酸氨溴索处理后AQP3基因表达增高,随着作用时间的延长,表达量逐渐增高,48h表
不明显。表达量与地塞米松作用时间没有明显规律。A549细胞经盐酸氨溴索作用后,
AQP5
24h和36h表达降低,与对照组相比较有显著差别(p0.001)。
和AQP5mRNA。
白印记;定量PCR;地塞米松;盐酸氨溴索。
2
in
Expression human cellline
ofAquaporinsairway
epithelial
Abstract
membrane
channel thatare most
Aquaporins(AQPs)are
proteins and,in cases,
highly
towater.Tenmammalian
havebeen
specificallypermeable AQPs identifiedtodate,and
havebeendemonstrated
homologues atalllevelsof
life,including
bacteria,yeast,andplant
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