抗番茄花叶病毒病良种筛选试验.docVIP

抗番茄花叶病毒病良种筛选试验番茄果实具有独特的风味,食用多样,近年来由于蔬菜周年生产,露地、保护地常年的连作和缺少抗性品种,致使番茄产量、面积都呈现下降趋势[1-5]。特别是番茄花叶病毒病广泛分布于各个栽培种植区,是番茄生产中的主要病害之一[6-8]。植物在受病原菌侵染后,其体内某些酶活性将发生相应的变化。由于植物、病原菌的遗传背景不同,各种酶的特性也不同,因此不同的植物与不同的病原菌互作中,酶发生不同的变化。为筛选出适合本地栽培的番茄品种,对番茄花叶病毒病田间自然发病指数和室内接种花叶病毒发病指数进行调查,并测定室内接种花叶病毒植株接种前后POD、PPO、PAL酶的活性。 1材料和方法 1.1试验材料 试验共20个品种,分别来自不同的育种单位,详见表1。 1.2材料处理及播种 番茄种子处理采用陈克农编写的《蔬菜栽培学实验指导》的方法[9]。当种子有80 %露白时播种(12月15日)于四川农大试验农场温床上,苗子长到2～4片真叶(1月5日)进行假植,到6～8片真叶,采用随机排列种植试验田中,每品种播种30株,重复3次。 1.3发病指数 田间自然发生病毒病,室内接种番茄花叶病毒(ToMV)。 田间自然发生病毒病的调查:定植后缓苗后10 d开始,每10 d调查1次,直至收获。 室内接种ToMV发病指数的调查:番茄7～8片真叶时进行摩擦接种,参照方仲达主编的《植病研究法》的方法[10],每个品种接种20株,重复3次,接种后所有材料放在(28±1)℃的温室生长,接种后第10 d、16 d、22 d进行发病指数调查。番茄ToMV毒源由中国农业大学李怀方教授惠赠,毒源保存于烟草新叶上。 番茄ToMV的分级标准及病情指数计算以蔬菜育种技术为参考[11]: 1.4酶液的提取及其活性测定 接种前酶液的提取和测定:番茄4～6片真叶完全展开时,取健康植株1～2片真叶,参照陈启林等[12]和邹琦主编《植物生理学》 [13]所采用的方法提取POD,PPO酶液,参照赵亚华主编《生物化学实验技术》[14]的方法测定POD,PPO酶液;参照熊庆娥主编的《植物生理试验》[15]上所采用的方法提取PAL酶液,并进行酶活性测定(所测叶片为鲜质量)。 接种后酶液的提取和测定:接种花叶病毒病2周后,取1～2片真叶,酶液提取测定方法同接种前。 1.5酶活性增加倍数比较 酶活性增加倍数=(接种后酶活性-接种前酶活性)/接种前酶活性 2结果与分析 2.1田间自然发病指数 从图1中可以看出,发病指数随着时间的延长逐渐增加,3月份的发病指数普遍较低,除了W262和Oh-2-2-6以外所有的品种发病指数均在10 %以下;4月份与5月份相比发病指数几乎没有变化,6月份各品种的发病指数有所上升。其中美味樱桃番茄、中杂9号、早红宝、W262-4、黄圣果、美国番茄发病指数在整个生命周期中均较低,对番茄花叶病毒病具有较强的抗性,Oh-2-2-11、黄化番茄发病指数4、5月份有所上升但是幅度较小,对番茄花叶病毒病有一定的抗性。4、5月份的发病率没有太大的差异,可能是因为5月份的温度虽然上升但是湿度较大,不利于病害发生,到了高温、相对湿度较低的6月份发病率则迅速增加。 2.2室内接种ToMV发病指数 从图2中可以看出,同田间一样随时间的延长发病指数也在增加。接种后10 d黄圣果和美国番茄的发病指数为0;美味樱桃番茄、中杂9号、加洲大红1号、早红宝、W262-4、川杂10号、Oh-2-2-11、黄化黄叶番茄的发病指数均小于40 %。接种16 d,开始没发病的黄圣果、美国番茄发病指数接近40 %;加洲大红4号、Oh-2-2-6、金刚2号大番茄发病面积扩展的速度比较快,接种22 d几乎全部发病并且有部分死去,宝大903番茄、金刚2号、加州大红4号发病指数为100 %,而中杂9号、早红宝、W262-4、黄圣果、美国番茄发病指数小于60 %,表现出较强的抗性,这与田间调查的结果一致。 2.3酶活性的测定结果及分析 2.3.1室内番茄接种ToMV前后PPO酶活性 由图3得知,接种后的PPO酶活性除L-402外均高于接种前的酶活性。接种前酶活性较高的品种有黄圣果、W262-4、Oh-2-2-6、L-402、W262、加洲大红1号、加洲大红4号酶活性均大于30;接种后宝大903番茄、川杂10号、黄化黄叶番茄、改良美国903酶活性均小于40;中杂9号、美国番茄、黄化黄叶番茄在接种前、后酶活性几乎没有变化。 2.3.2室内番茄接种ToMV前后POD酶活性 由图4可以看出,接种后POD酶活性均比接种前高。接种前除了宝岛巨星、改良美国903的POD酶活性大于5,其余