HPV16、18E6蛋白表达在宫颈癌组织中的意义.pdfVIP

江西医药 2008年 第43卷 第 l0期 HPV16、18E6蛋白表达在宫颈癌组织中的意义 叶芳萍 郑建红 张萍(江西省萍乡市第二人民医院，萍乡，337000) 摘要 目的 评价HPV16、18早期蛋白E9表达在宫颈癌组织中的应用价值。方法采用SP免疫组化染色法，检测50例宫颈鳞状 细胞癌。40例慢性宫颈炎及 40例正常宫颈组织中HPV16、18E6蛋白表达。结果 癌组中E6的阳性率为68％(34／50)，慢性宫颈 炎中5％(2／40)。正常宫颈组织中均为阴性，良恶性组HPV16、18E6的阳性率差异有显著意义(190．05)。结论HPV16、18E6感染 与本地区宫颈癌病因学密切相关，E6单抗可作为预测 HPVI6、18感染及判断早期宫颈癌的标记之一。 关键词 官颈肿瘤：免疫组织化学 中图分类号：R737．33 宫颈癌是女性生殖系统最常见 的恶性肿瘤 ，在 染色反应者为阴性 (一)。统计学处理采用 x检验 。 世界范围内其发病率仅次于乳腺癌居第二位，且引 2结果 起较高的死亡率．也是危害我国妇女的主要恶性肿 HPV16、18早期蛋 白E6单抗在各组的表达结 瘤之一 子宫颈癌的病因及其发病机制的研究一直 果见附表 经统计学处理，良、恶性组阳性率之间差 受到国内外学者的高度重视。近年对宫颈癌组织中 异有非常显著意义 (尸0．05)。癌组中E6阳性着色见 高危组人乳头瘤病毒(HPV)16、18型感染的检测主 于各层癌细胞核 内。在28例有挖空细胞样癌细胞核 要采用分子生物学技术 ．但该技术的开展需要一定 内均示E6阳性表达 癌组中34例E6阳性者26例 的实验室条件。我们采用免疫组化法对 HPV16、18 癌旁组织中见到伴有 CIN11～m级改变 (CINII8 早期蛋白E6抗体进行了应用，获得了满意的效果。 例 ．CINllI17例)见到E6的阳性表达。而慢性宫颈炎 现报告如下 ： 2例 E6阳性仅见于其正常上皮的基底层少数细胞 1材料与方法 核内 1．1标本选择 ：收集 2000年 1月～2006年 12月间 附表 E6抗体在 3组材料中免疫组化表达情况 (n) 已确诊的本地区人El浸润性子宫颈鳞癌5O例 ．并随 机取同期诊断为慢性宫颈炎和正常宫颈组织材料各 40例为对照组 所有标本组织经 l0％福尔马林固 定 ．常规石蜡包埋切片。 1．2方法与试剂：免疫组化采用 sP法Ill，SPKit(鼠)为 美国Zvreed公司产品，购于福州迈新公司。HPV16、 3讨论 18早期蛋 白E6单抗 (HPV—CIP5)为美国SantaCruz 体外实验研究表明．在来 自宫颈癌的细胞中， 公司产品及皂角苷 (saponin)~者均购 自北京中杉生 HPV16，18的E6和 E7开放 阅读框架 (ORFs)常常 物公司。 发现是完整的切具有转录活性 ．提示 E6和 E7基 因 1．3染色步骤 ：切片滴加A液(过氧化酶阻断液)15min． 的恶性表型2[1。HPV16、18的E6和E7作为病毒癌今 PBS液洗 ：切片入 lOlxg／ml的皂角苷液内消化30min． 音蛋 白已被认为与宫颈癌病因学密切相关翻。HPV16。 室温，PBS液洗 ；切片加B液(非免疫性动物血清)孵 l8感染细胞后．其 E6基因编码复制的E6蛋 白可存 育20min；加 E6一抗(稀释度 l：30)45min，室温，PBS 在于细胞核 内。HPV16．18E6单抗通过 HPV16。18 液洗 ；切片加 C液 (生物素标记 的二抗)lOmin，PBS 的E6基因片断克隆后得出．通过免疫组化技术 ．它 液洗 ；切片加 D液(键霉素抗生物素蛋白过氧化酶) 能有效地标记细胞内存在的HPV16．18E6蛋白且可 10min，PBS液洗 ；DAB显色，苏木精衬染 ，封片。实 用福尔马林固定．石蜡包埋的组织中。本组癌组中阳 验均用 已知子宫颈鳞癌 E6阳性片作 阳性对照 ．以 性率达 68％．表明高危组 HPV16．18感染与本地