全蛋白提取试剂盒TissueorCellTotalProtein.PDFVIP

全蛋白提取试剂盒 Tissue or Cell Total Protein Extraction Kit 产品编号：BSP003 包装规格：50 Assays 产品简介 本试剂盒用于从哺乳动物组织和培养细胞中提取全蛋白， 用含有蛋白酶抑制剂及磷酸酶抑制剂的裂解缓冲液Lysis Buffer 匀浆裂解组织或细胞，作用温和，提取过程简便高效,可以提取出培养细胞或动物组织中的决大多数蛋白质。获得的全 蛋白可用于Western Blot 、免疫共沉淀，酶活性分析，Pull down,EMSA 等后续研究，但不能用于蛋白激酶及磷酸酶免疫共 沉淀的研究，因本试剂盒中包括这两种酶的抑制剂，可以每次从107 个培养细胞或200 mg 动物组织提取蛋白质，本试剂盒 可以使用50 次。 产品特点 1. 提取的蛋白质包括膜,核,核基质和胞质蛋白,而且最大限度保持蛋白质活性。 2. 整个操作过程只需要30 分钟左右。 7 3. 即可以用于培养细胞（50x10 个），有可以用于动物组织（50x200 mg ）蛋白质的提取。 4. 避免蛋白酶和磷酸酶对蛋白质的降解，保持蛋白质的完整性和天然活性。 5. 不需要超速度离心，可以同时处理多个样品。 运输和保存条件 在常温条件下运输，收到后，请将磷酸酶抑制剂, 蛋白酶抑制剂和PMSF -200C 保存，其余2-8°C 保存，保质期一年。 试剂盒组成 成份 BSP003 Lysis buffer 50 ml 蛋白酶抑制剂 50 μl 磷酸酶抑制剂 250 μl PMSF 500 μl 操作步骤 A 实体组织蛋白的提取 1. 在每1mL 预冷的Lysis Buffe 加入5 ul 磷酸酶抑制剂,1ul 蛋白酶抑制剂和10 ul PMSF 混匀。冰上保存数分钟待用。 2. 将100-200 mg 固体组织置于培养皿中，手术剪剪碎成3mm×3mm 左右的小块，尽量去除脂肪组织和结缔组织等非目 的组织，用PBS 洗涤两次，离心取沉淀后加入0.5～1 mL 上述配制好的预冷的 Lysis Buffer，4°C 下玻璃匀浆器上下手 动匀浆15-30 次。或超声破碎细胞，每次30 S ， 3～4 次，每次间隔1 min， 置于冰上冷却。均质匀浆或超声破碎细 胞后应镜检，细胞破碎率不小于90 ％，同时没有明显的组织小块。 3. 取组织匀浆液转移到1.5 mL 预冷的离心管，冰上放置10 分钟左右,期间取出剧烈震荡2-3 次,再14000 rpm，4°C 离心 15 min。 4. 取上清转移至新的预冷的离心管中，即为全蛋白提取物，进行蛋白定量和其他蛋白质相关实验。 5. 分装保存于-70°C，避免反复冻融。 B 培养细胞蛋白提取 1. 贴壁培养的细胞，吸去培养基后，加入10 mL/150 mm 培养板的预冷的一倍PBS 洗两次，每次振摇数次以尽量去除培 养液。 2. 悬浮培养的细胞或用细胞刮子刮下的贴壁细胞，将细胞及培养液移至离心管中，1000rpm 离心10 min，再用10 mL/150 mm 培养板的预冷PBS，1000 rpm 5 min 洗两次。 3. 在每1 mL 预冷的 Lysis Buffe 加入5ul 磷酸酶抑制剂， 1 ul 蛋白酶抑制剂和10ulPMSF 混匀。冰上保存数分钟待用。 4. 在上述培养板或离心管的细胞中，加入上述配制好的预冷的Lysis Buffer，加入量如下表所示： 细胞数量 培养板或培养瓶的规格 Lysis Buffer 加入量 107 个 100 mm 培养板或150 cm2 培养瓶 1 mL～2 mL 2 5×106 个 60 mm 培养板或75 cm 培养瓶 0.5 mL～1 mL 5. 冷室或冰上操作，贴壁细胞用细胞刮子刮下，连Lysis Buffer 一同转移至新的预冷的离心管中；悬浮培养