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棉花纤维RNA提取方法的比较及酵母双杂交文库的
中国农学通报 2012,28(30): 177-183
Chinese Agricultural Science Bulletin
棉花纤维RNA 提取方法的比较及酵母双杂交文库的构建
1,2,3 1,2,4 1,2,3 1,2,3,4 2,3
徐 雯 ，邓宗汉 ，陈婷婷 ，彭良才 ，夏 涛
1 2
（华中农业大学作物遗传改良国家重点实验室，武汉430070 ；华中农业大学生物质与生物能源研究中心，武汉430070 ；
3 4
华中农业大学生命科学技术学院，武汉430070 ；华中农业大学植物科学技术学院，武汉430070 ）
摘 要：为了从棉花纤维中提取高质量的RNA 用于构建酵母双杂交文库，采用4 种不同的方法提取9 天
和19天棉花纤维的RNA 。琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度法检测结果表明：热硼酸法适用于初生幼嫩
纤维和次生加厚纤维的RNA 提取，CTAB-PVP 法仅适用于初生幼嫩纤维的RNA 提取，异硫氰酸胍法和
高盐高pH 值法提取的RNA 由于杂质含量较多而影响反转录效果。采用热硼酸法大量提取总RNA ，纯
化后的mRNA 反转录为cDNA ，通过重组将扩增的cDNA 片段定向插入到pGADT7-Rec AD 克隆载体
7
中，得到棉纤维9 天和19 天的酵母双杂交cDNA 文库。2 个文库的滴度分别是1.01 ×10 cfu /mL 和8×
6
10 cfu /mL ，cDNA 插入片段长度集中分布在250~2500 bp 之间。由此可以看出，构建的2 个棉纤维文库
质量较高，可用于棉花纤维素合成和调控途径的研究。
关键词：棉花纤维；改良热硼酸法；CTAB-PVP 法；酵母双杂交文库
中图分类号：Q71 文献标志码：A 论文编号：2012-0750
RNA Isolation and Yeast Two Hybrid Library Construction of Cotton Fibers
1,2,3 1,2,4 1,2,3 1,2,3,4 2,3
XuWen ,DengZonghan ,ChenTingting ,PengLiangcai ,XiaTao
1
(NationalKeyLaboratoryofCropGeneticImprovement,HuazhongAgriculturalUniversity,Wuhan430070;
2BiomassandBioenergyResearchCentre,HuazhongAgriculturalUniversity,Wuhan430070;
3CollegeofLifeScienceandTechnology,HuazhongAgriculturalUniversity,Wuhan430070;
4CollegeofPlantScienceandTechnology,HuazhongAgriculturalUniversity,Wuhan430070)
Abstract: AhighqualityofRNAwasessential
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