人关节液对骨髓间充质干细胞定向分化影响的实验探究.pdfVIP

目 录 1 人关节液对骨髓间充质干细胞定向分化影响的实验研 究 ………………………………………………………l 1．1 中文摘要………………………………………………………1 ]02 英文摘要………………………………………………………3 1．3 前言……………………………………………………………6 1．4 材料与方法……………………………………………………8 1．5 结果……………………………………………………………17 1．6 讨论……···………………………·………··…………·……··19 1．7 结j淦·…………·……-…·……………·………·……………．．·26 1。8 参考文献………………………………………………………27 1．9 英汉缩略词对照表……………………………………………30 2 附图……………………………………………………·…·…·31 3 致谢··…………·…·……………·………····……·……·……·36 骨髓间充质干细胞修复关节软骨损伤的研究进展(综述) 4 ．．………………………………………………………………·37 5 攻读学位期问发表的论文……………………………………49 I愀鼎 人关节液对骨髓间充质干细胞定向分化影响酶实验研究 摘 要 bone 目的 体外获得人骨髓间充质干细胞(humanmarrow stem 工程基质的使用奠定一定的基础。方法从因创伤导致不同部位的骨折需 行骨折复位及髂骨植骨术的志愿者中，获取骨髓，采用全骨髓、贴壁培养 存和复苏。实验在倒置相差显微镜下观察细胞生长形态；取生长状态良好 的P3代细胞进行表面标志物的表达和细胞表型的鉴定；取生长状态良好的 P1、P2、P3代细胞，分别用胰蛋白酶消化、培养，以培养时间为横轴，细 胞数为纵轴，绘制hBMSCs生长曲线图。在无菌操作下，患者取坐位，双 膝下垂，穿刺部位按常规进行皮肤消毒，用2％禾1J多卡因作局部麻醉， 于健康志愿者的膝关节的髌骨下缘、髌韧带外侧lcm处，定位后用一 次性10号注射针头与胫骨平台平行，向内呈45度角i穿刺进入，针 头完全刺入即可，抽取膝关节内的关节液，将其与生长良好的P3细胞混 合用于实验，将24孔板盲法随机分为3组(A组、B组及C组)，每组8孔， 每个孔板内放置无菌并用多聚赖氨酸预处理过的爬片，其中：A组：单纯关 天在倒置显微镜下观察细胞形态变化和生长情况，分别于诱导后第7，14， 21天行甲苯胺蓝染色检测酸性糖胺多糖表达，免疫组化染色检测细胞Ⅱ型 t 胶原表达。 结果 经全骨髓、贴壁培养法培养分离获得了纯度较高 hBMSCs，细胞呈均一的长梭形、短梭形及多角形，漩涡状或辐射状结构， 细胞增殖速度减慢，由长梭形变为多角形、椭圆形，细胞外基质呈甲苯胺 蓝异染性阳性，II型胶原免疫组化阳性，表现出向关节软骨细胞分化的特 点。 结论全骨髓、贴壁培养法可成功分离hBMSCs，该方法具有操作简 便、经济及污染少等优点。该实验结果提示，关节液对hBMSCs向软骨细胞 分化有正性促进作用，关节液中可能含有促hBMSCs向软骨细胞方向分化的 物质，支持关节液作为软骨组织工程基质使用。 关键词：关节液 骨髓间充质干细胞 软骨细胞‘软骨组织工程 共培养 Researchon influencebonemarrow stemcells mesenchymal differentiationfluidinvitro byjoint