在酿酒酵母中重构棉子糖生物合成途径的基础研究 - 现代食品科技.pdf

现代食品科技 Modern Food Science and Technology 2017, Vol.33, No.5 在酿酒酵母中重构棉子糖生物合成途径的基础研究 周英彪 1,2 2 2 1 2 ，田朝玉 ，朱玥明 ，张娟琨 ，孙媛霞 （1.教育部发酵工业微生物重点实验室，天津科技大学生物工程学院，天津 300457） （2.工业酶国家工程实验室，中国科学院天津工业生物技术研究所，天津 300308） 摘要：研究了在酿酒酵母中重构棉子糖生物合成途径，为后续高效生物合成棉子糖细胞工厂的构建奠定基础。敲除酿酒酵母中 能降解棉子糖的蔗糖酶与α-半乳糖苷酶的基因构建出 E1(Δsuc2::Δmel1)；在此基础上，构建单基因表达拟南芥肌醇半乳糖合成酶基因 gols1 与gols3 及棉子糖合成酶基因 sip1 与sip5 的工程菌株，及构建双基因组合表达（gols1 ::sip1 、gols1 ::sip5 、gols3 ::sip1 与gols3 ::sip5 ） 工程菌株；比较工程菌株代谢产物如肌醇、UDP-半乳糖、肌醇半乳糖、蔗糖及棉子糖等生成情况，验证在酿酒酵母中重构棉子糖生 物合成途径的可行性。研究表明，通过共表达外源肌醇半乳糖合成酶及棉子糖合成酶基因，并敲除能降解棉子糖的蔗糖酶与 α-半乳 糖苷酶的基因，在酿酒酵母中实现了棉子糖生物合成途径的重构；肌醇半乳糖合成酶与棉子糖合成酶基因的不同共表达组合，棉子糖 生成量有差异；重构的棉子糖生物合成途经改变了酿酒酵母原始菌株的代谢流量。 关键词：生物合成；棉子糖；酿酒酵母；肌醇半乳糖合成酶；棉子糖合成酶 文章篇号：1673-9078(2017)5-121-128 DOI: 10.13982/j.mfst.1673-9078.2017.5.020 A Basic Study on a Raffinose Biosynthetic Pathway Constructed in Saccharomyces cerevisiae 1,2 2 2 1 2 ZHOU Ying-biao , TIAN Chao-yu , ZHU Yue-ming , ZHANG Juan-kun , SUN Yuan-xia (1.Key Laboratory of Industrial Fermentation Microbiology, Ministry of Education, College of Biotechnology, Tianjin University of Science Technology, Tianjin 300457, China) (2.National Engineering Laboratory for Industrial Enzymes, Tianjin Institute of Industrial Biotechnology, Chinese Academy of Sc