凝胶渗透色谱正确选择检测器的重要性.pdfVIP

英国马尔文仪器有限公司 凝胶渗透色谱正确选择检测器的重要性 作者：Stephen Ball, 马尔文仪器纳米颗粒及分子表征产品市场经理 凝胶渗透色谱分析法或尺寸排除色谱法 （GPC/SEC ）是高分子、大分子和蛋白质常用的主要分析手 段，其中最主要的原因是它能对分子量和分子量分布数据进行定量表征。人们通常将上述分析方法分 为两步。第一步：利用含有适当特性微孔填充材料的色谱柱对溶解样品按照分子大小/体积进行分离； 第二步：利用适当的检测仪器对被分离的样品进行分析。本文中，来自马尔文仪器的产品市场经理 Stephen Ball 将向您阐述可以采用的检测器技术及其提高分析效率的潜在可能。 GPC/SEC 系统的传统配置为：采用单个折光指数 (RI) 检测器对浓度进行测量，在这种配置下，利用 参照校准数据可以得到相对分子量分布数据。这对某些常见的高分子材料和/或质量控制比较适合， 但分析者越来越多地倾向于采用具有如下特点的多检测仪组合GPC/SEC 系统：  无需色谱柱校准即可取得所有材料的绝对数据，  极大提高数据处理效果 目前市面上有很多可用于GPC/SEC 的检测仪。由于分析具有两阶段的特性，因此在选择合适的系统 时有很多问题需要考虑。完全一体化的单一检测器固然有优势，但我认为它与选择最佳检测仪组合解 决方案相比只能说是次优方案。对检测器的选择进行优化是一种既直接又高效的方法，具有较多优势， 比如可以仅通过一次实验就获得能确定分子量、流体力学尺寸和分子结构的表征。 这就提出了一个问题：如何才能为以应用为基础发掘最佳的检测器系统？这个问题牵涉很广，但却为 我们初步了解不同检测器的优势提供了一个良好的契机。 首先从粘度计开始，它可以测量各种粘度参数，而对于聚合物溶液而言，它可以建立起与样品分子量 之间的关联。当与RI 检测器一同使用时，粘度计可以实现普氏校准，系统无需再寻找与待测样品十 分接近的标准样品，同时也提高了分子量分布数据的完整性。粘度测量还可以确定结构方面的信息， 比如可以对聚合物分支进行定量分析。 接下来让我们来看看静态光散射检测器，它们可以对绝对分子量进行直接测量。由于市场上存在着各 种不同的检测仪，如LALS、RALS 和 MALS，因此问题就开始变得复杂了。上述所有这些检测仪都 通过测量散射光的能量来得到分子量，但散射光能量随角度各不相同，比如，小角度光散射检测仪 o o (LALS) 以7 的角度检测入射光线，直角光散射 (RALS) 以90 测量入射光线，此外还有多角度测量 光散射仪 (MALS)。 Page 1 of 2 英国马尔文仪器有限公司 上述仪器各有优势，本文不一一展开论述，但我们需要了解的关键是它们各自的特点？对大分子而言 (12nm)，其产生的散射光强度的变化与入射光线角度呈函数关系。得到分子量的数学方法是利用入 射光线在0o 时的散射光强度通过锐利散射方程得到分子量，而0 度角的散射光是无法直接测量的， 因此人们开发了专门针对检测这些大分子的方法。 LALS 检测仪以非常接近入射光线的角度进行测量，从而无需另行外推计算。MALS 检测仪则进行多 个角度的测量，并利用测量结果外推得到0o 时的散射光强度。将各种技术放在一起探讨已成为行业 的一种趋势和偏好，例如，SEC-MALS 已成为蛋白质表征的标准方法，而RALS 则被认为是基于分 子大小的蛋白质表征的最佳选择。 动态光散射技术 (DLS) 进一步丰富了光散射检测仪的选择范围，它是一种广泛应用的测定纳米级粒径 范围的粒度测量手段，对某些GPC/SEC 用户非常有效。该技术的主要应用领域是蛋白质分析，它可 以对流体力学分子半径进行精确测量。DLS 检测仪同时还能进行静态光散射测量，由此开启了进行分 子量测量的可能。 最后还有一种