con a beads 1124 - 抗体纯化,内毒素去除,蛋白纯化填料,抗体纯化 .pdfVIP

Con A Beads 目录 1. 产品介绍………………………………………………………………….……..1 2. 纯化流程………………………………………………………………………...1 3. 填料清洗………………………………………………………………………...2 4. 订购信息及相关产品…………………………………………………………2 1.产品介绍 Con A Beads 是一种将伴刀豆球蛋白A(简称Con A)与琼脂糖偶联纯化一些糖蛋白的亲和 层析介质。Con A 是从巨豆（Jack bean, Canavalia ensiformis ）中分离出来的一种植物 血凝素，能与含有ɑ-D-吡喃甘露糖基、ɑ-D-吡喃葡萄糖基以及与其空间位置相关的分子基 团的结合。Con A 与糖类分子结合主要在C-3、C-4 及C-6 的羟基部分。Con A 与D-吡喃 甘露糖的结合比与D-吡喃葡萄糖要强些。Con A Beads 主要用来分离和纯化一些糖蛋白、 膜蛋白、糖脂、多糖、 甘露糖苷或葡糖苷残基的膜囊泡、lgM、激素脂蛋白等。例如人血 清中胰蛋白酶抑制剂、碱性磷酸酯酶、小牛脾磷酸二酯酶、不同变种的甲胎球蛋白和某些激 素如绒毛膜促性腺激素（HCG ）、促黄体激素（LH ）等物质都可以用它纯化。Con A Beads 应用范围广，具体性能见表1。 表1. Con A Beads 产品性能 性能 指标 基质 4%琼脂糖微球 配体 Con A 载量 20mg 甲状腺球蛋白 /ml 介质 粒径 (μm) 45-165 最大流速 0.1 MPa, 1 bar pH 稳定范围 4-9 储存缓冲液 0.1M 醋酸盐 ，1MNaCl,1mMCaCl ，1mM MnCl ,1mM MgCl , 20% 乙 2 2 2 醇, pH6.0 储存温度 2°C - 8°C 2.纯化流程 2.1 Buffer 的准备 所用水和 Buffer 在使用之前建议用0.22μm 或0.45μm 滤膜过滤。 Con A Beads 在pH 小于5.0 ，Mn2+和Ca2+的存在时具有吸附活性。 结合/洗杂 Buffer: 20mM Tris-HCl ，0.5M NaCl ，1mMCaCl2 ，1mM MnCl2 ，pH7.4 洗脱 Buffer: 20mM Tris-HCl ，0.5M NaCl ，1mMCaCl2 ，1mM MnCl2 ，0.1M-0.2M ɑ-D- 甲基甘露糖苷或ɑ-D-甲基葡萄糖苷 ，pH7.4 注：洗脱液中ɑ-D-甲基甘露糖苷或ɑ-D-甲基葡萄糖苷浓度可根据物质吸附能力进行线性或 1 / 3 州天地人和生物科技有限公 司 梯度洗脱。甘露糖和葡萄糖亦可以做洗脱物质，但洗脱能力较弱。 结合能力较强的物质可采用降低洗脱液pH 洗脱 ，但不要低于pH4.0。 可采用硼酸盐作为洗脱液 ，如0.1M 硼酸盐 ，pH6.5。 2.2 样品准备 上柱之前要确保样品溶液有合适的离子强度和pH 值 ，可以用结合/洗涤缓冲液对血清样品、 腹水或细胞培养液稀释 ，或者样品用结合/洗涤缓冲液透析。 样品在上样前建议离心或用0.22μm 或0.45μm 滤膜过滤 ，减少杂质，提高蛋白纯化效率 和防止堵塞柱子。 2.3 样品纯化 1. 将Con A Beads 装入合适的层析柱 ，层析用5 倍柱体积的结合 Buffer 进 平衡 ，使填 料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下 ，起到保护蛋白的作用。 2. 将样品加到平衡好的Con A Beads 中（保证目的蛋白与Con A Beads 充分接触 ，提高 目的蛋白的回收率），收集流出液。 3. 用10-15 倍柱体积的洗杂 Buffer 进 清洗，去除非特异性吸附的杂蛋白，收集洗杂液。 4. 使用5-10 倍柱体积的洗脱 Buffer ，收集洗脱液 ，即目的蛋白组分。 5. 依次使用3 倍柱体积的结合 Buffer 和5 倍柱体积的去离子水平衡填料，最后再用5 倍 柱体积的20%的乙醇平衡