循环内皮细胞及内皮细胞微粒的临床应用及其进展.docVIP

循环内皮细胞及内皮细胞微粒的临床应用及其进展 摘要 循环内皮细胞（circulating endothelial cells，CECs）是30多年前在外周血涂片标本中发现的，自此陆续出现了很多关于CECs的提取、计数及应用的研究，特别是免疫磁珠分离法及荧光激活细胞分离技术的应用促进了对CECs进一步的了解。内皮细胞微粒（endothelial microparticles，EMPs）是在1990年Hamilton等将补体蛋白C5b-9和钙离子载体A23187作用于脐静脉内皮细胞的实验中第一次通过流式细胞仪检测出一种的微粒，至此开始陆续有很多实验对EMPs的特征进行了描述并证实在多种疾病中有明显升高。本文中，我们通过总结CECs及EMPs的计数方法及临床意义，深入了解循环CECs及EMPs的临床应用发展。 关键词 循环内皮细胞 内皮细胞颗粒 检测方法 临床应用 循环内皮细胞（circulating endothelial cells，CEC）是指能够在外周血中测得的血管内皮细胞VEC（vascular endothelial cell）0–1%），正常人体内的CECs数量非常少（0-10个/ml），血管损伤或新血管形成时，CECs会显著增多，因此CECs可以评估血管的病变程度，可直接反映血管内皮损伤。内皮细胞微粒（endothelial microparticles，EMPs）是活化或凋亡的内皮细胞释放的直径﹤1微米级大小的囊泡，在反映内皮细胞的功能及血管生理中有重要的生物学意义，介导血管炎症、血栓形成，血管舒缩反应、血管生成等过程。EMPs是评价内皮细胞功能紊乱的标志物，在不同的疾病中有着不同的反映。 1、CECs及EMPs的来源 CECs是继发于血管损伤后血管内皮脱落的成熟内皮细胞，然而细胞脱落的机制有多种可能，目前尚未有统一结论。不同的实验模型研究报道主要考虑可能由于机械损伤、内皮细胞粘附性能缺失、蛋白酶或细胞因子介导、细胞程序性凋亡等触发内皮细胞的抗原暴露，从而逐步进展至内皮细胞损伤与功能障碍，直至细胞凋亡或坏死脱落[1; 2]。 CECs在活化或凋亡时释放EMPs，关于EMPs的形成机制至今仍未明确阐明，可能与细胞骨架的破坏、膜磷脂不对称分布消失等原因有关。EMPs表面表达多种内皮细胞膜表面的蛋白抗原，包括成熟内皮细胞表达的特异性黏附分子，如ICAM-1 (CD54)、选择素E (CD62E)、选择素P(CD62P)、PECAM (CD31)、VE钙粘蛋白 (CD144)等，以及其他特异性抗原，如endoglin (CD105)、S-endo1 (CD146)等。不同EMPs所表达的膜抗原会因其产生原因的不同(活化或凋亡)而有所不同[3]。 2、CECs及EMPs的测定 最早CECs的测定是在显微镜下对其形态学检测来分离及计数，但是这些方法都存在着血小板或其他细胞的干扰、对检测人员的要求较高、且缺乏特异性等问题，近年来逐渐出现了新的检测方法，如免疫磁珠法、荧光激活细胞分离技术，这些技术准确性高，特异性强。 2.1 CECs的测定 2.1.1免疫磁珠法（Immunomagnetic isolation） 免疫磁珠法最早是在用于检测外周血中的罕见细胞（例如转移性癌细胞），CECs也是外周血中的罕见细胞，免疫磁珠法能较好的检测CECs的存在。此技术现将抗内皮细胞抗体包被于顺磁性微粒（DynabeadTM）上，然后再从全血中分离这些顺磁性微粒结合的内皮细胞[1]。 由于CD146分子在活化淋巴细胞、滋养层细胞、间充质干细胞、牙周组织及恶性肿瘤中均有一定程度的表达，所以为了纯化CECs的提取，必须对细胞进行二次标记，即结合荆豆凝集素Ulex Europaeus lectin1，UEA-1）标记，其在多种疾病的内皮细胞中有着稳定的阳性表达，例如，肝窦内皮细胞UEA-1标记阳性而vWF则鲜少或缺失，类似的情况在甲状腺肿瘤中亦有发现。在免疫磁珠法应用中，需注意内皮祖细胞（EPCs）的存在，CECs及EPCs代表了血液中不同的两组非造血细胞，有着不同的来源，CECs来源于成熟内皮细胞，而EPCs来源于骨髓。CD146、UEA-1在EPCs中均有表达，且Delorme等[4]在CD146标记的免疫磁珠法分离细胞中证实了有EPCs的存在，虽然他们的结果有待进一步的确证，且近年来已发现了EPCs的部分特异性分子表达[5; 6]（如CD 34 +, FGFR+, VE-Cad he rin +, c-k it+ , KDR+ , CD1 33 +）但是仍希望有新的免疫磁珠分离法的方案来纯化CECs的提取及计数。 2.1.2 荧光激活细胞分离技术（fluorescence-activated cell sorting，FACS ）