人肝肿瘤细胞选择性白细胞介素- 7 剪接变异体 - 中国病理生理杂志.pdfVIP

中国病理生理杂志 　Chinese Journal of Pathophysiology 　2004 ,20 (8) :1411 - 1413 ·14 11 · ( ) [文章编号] 　1000 - 4718 2004 08 - 1411 - 03 人肝肿瘤细胞选择性白细胞介素 - 7 剪接变 异体 cD NA 的克隆和序列测定 1 1 2 潘德顺 , 　吴培诚 , 　孔凡虎 (1 广东药学院药学系 , 广东 广州 510240 ; 2 武汉一冶职工医院外科 , 湖北 武汉 430068) 　　[摘 　要] 　 目的:寻找人肝肿瘤细胞选择性的白细胞介素 - 7 ( IL - 7) 剪接变异体 。方法 : 运用自行设计的 IL - ( ) 7 引物 ,采用逆转录聚合酶链反应 RT - PCR 技术 ,分离正常肝组织 、原发肝癌组织 、培养肝癌细胞株 IL - 7 mRNA , ( ) 再对电泳所获条带进行克隆、测序 。结果 : 正常肝组织 、原发肝癌组织 、培养肝癌细胞株 BEL - 7402 和 SMMC - 7721 都能检测到 IL - 7 mRNA ,而且从肝癌组织 、培养肝癌细胞株分离出 1 条新带 ,经亚克隆及测序 ,证实该条带系人 IL - 7 基因 cDNA 第 4 外显子缺乏所致 。结论 : 肝癌组织及培养的肝癌细胞株存在选择性 IL - 7 剪接变异体 。该变异体 的发现 ,为肝癌病人的免疫调节紊乱以及肝癌病人的临床免疫治疗提供了新的研究方向。 [ 关键词] 　白细胞介素 7 ; 克隆 ,分子 ; 序列分析 ; 肝肿瘤 ; 剪接体 　　[ 中图分类号] 　R392 　　　　　[文献标识码] 　A 　　肝癌是死亡率最高的恶性肿瘤之一 。提高肝癌 2 　方法 的治疗效果是肿瘤工作者共同关注的问题 。免疫治 21 　引物设计与合成 　根据人 IL - 7 基因 cDNA 序 疗是利用各种免疫调节因子 ,来诱导 、增强机体的抗 列 , 合 成 引 物 。引 物 A : 5 ’- ATGTTCCCAT 肿瘤反应 , 以达到控制肿瘤进展的目的 ,是 目前肿瘤 GTTTCTTTTA GG - 3 ’, 引物 B : 5 ’- CA GTGTTCTT 治疗学研究的热点 。人 白细胞介素 - 7 (human inter TA GTGGCCCATC - 3 ’,该引物由上海博亚生物技术有 leukin - 7 ,hIL - 7) 主要 由骨髓基质细胞产生 , 并在 限公司合成 。 肝 、脾 、胸腺等组织中检测到 hIL - 7 mRNA 的表达 ; 22 　主要试剂 　总 RNA 提取试剂 , 购 自美 国 IL - 7 能刺激 B 前细胞的增殖 ,增强 T 淋巴细胞的生 ( Gibco - BRL 公司 ; 小 鼠白血病病毒反转录酶 M - 物活性 ,并证明 IL - 7 具有一定的抗肿瘤作用[ 1 - 3 ] 。 MLV) 、寡核苷酸引物等购 自美国 Promega 公司 ; 耐 以往研究发现 :人白血病细胞产生不同分子量 IL - 7 热 DNA ( Taq DNA ) 聚合 酶 、核 糖 核 酸 酶 抑 制 剂 剪接变异体 mRNA ,推测 IL - 7 剪接变异体可能与肿