低分子肝素对大鼠脑缺血后小胶质细胞、单核细胞活化及TNF-α表达影响.pdfVIP

中文摘要 目 的 I关于缺血后脑损伤的机制，目前较多的研究兴趣集中在脑缺 血再灌注后的炎症反应。梗死后参与脑组织损伤的炎细胞包括内 源性(小胶质细胞)和外源性(多形核白细胞、中性粒白细胞、单核 细胞)。神经元死亡或者亚致死都可引起小胶质细胞和单核细胞 的激活。活化的小胶质细胞和血源性单核细胞可释放毒性产物、 产生吞噬作用和免疫反应加速神经元死亡，对缺血性脑损伤起促 进作用。有研究表明活化的小胶质细胞是脑缺血后TNF—d的主 要来源。TNF一仪能启动和调节组织局部炎症反应，是控制脑缺 血再灌注损伤的主要细胞因子。 近期大量研究证实作为经典抗凝剂已广泛应用于临床的肝素 是强有力的抗炎制剂。其抗凝及抗炎作用是通过肝素分子上不同 基团实现的。但这些研究多局限于非缺血性疾病或心肌缺血性疾 病，关于肝素对脑缺血后局部炎性反应有无影响研究很少，国内尚 无相关报道。}本研究将低分子肝素应用于脑缺血后大鼠，旨在探 讨低分子肝素对小胶质细胞、单核细胞活化及炎性介质俐F一＆ 的表达有无影响，为肝素应用于临床提供新的药理学依据，为开发 新的抗炎制剂提供理论依据。 【材料与方法 分别再灌注3、24、48、72小时注射用水对照组，速碧林治疗组，假 手术组，正常对照组，每组各5只。用longa法制备大鼠脑缺血再 灌注模型。至相应时间点后，各组大鼠在麻醉下开胸，用0．9％生 理盐水经左心室快速灌流，迅速取脑并置液氮罐浅保存。 方法： 1．免疫荧光方法：脑组织进行半导体冰冻冠状切片(101xm)， 进行免疫荧光染色及HE染色。 2．免疫组优方法：冰冻切片完成后，取24小时组及假手术 组、正常对照缎脑组织，石蜡包堙，进行石蜡切片(41xm)，进行免 疫组化染色及HE染色。 3。统计学处理：采用半定量分析方法，计数梗死灶周匿不檑 交叉8个离倍视野中的阳性细胞数，数据进行t检验，P≤O．05有 统计学意义。 续 累 1．小胶屡缨胞、单核细胞活化的特点：3小时缓期可见较少 阳性细胞，条状或带状分布。24～48小时阳性缨胞增多，墨环状 或带状分布于援死灶周围。72小时与48小时摆比梗死灶闫边阳 性细胞减少，僵梗死烛内可见中等量阳性细胞，细胞形态大丽圆。 2．TNF—oc表达细胞的分布特点：阳性细胞主要分布予梗死 灶周围，与活化小胶质细胞、单核细胞分布基本一致。 3．低分子肝索对小胶履、单核细胞疆化的影响：低分子肝素 治疗组与对照组相比，24、48、72小时组均可见治疗组梗死灶周豳 38．8583±5．2119对37．3458-+3．7260(P≤O。002)]。 4．低分子肝索对缺血2小时再灌注24小时后TNF—Or．表达 的影响：低分子肝素治疗组与对照组相比可见治疗组阳性细胞明 4-5．8053对22．9583±6．085(P≤O．001)]。 显减少[35．5667 ·2· 讨 论 本研究在大鼠脑缺血后用低分子肝素治疗，观察小胶质、单核 细胞活化及TNF一仪表达的变化。所得结果，肝素对大鼠脑缺血2 小时再灌注24-72小时后的小胶质细胞、单核细胞活化及缺血2 小时再灌注24小时后的TNF—Ct．表达有明显抑制作用。 很多研究表明，脑缺血后炎症反应与小胶质、单核细胞活化， 分泌炎性介质有关。脑缺血后小胶质细胞迅速向损伤区迁移、增 生、活化，同时单核细胞浸润、活化。本研究的结果与LeesGL等 的发现～致，缺血3小时后小胶质细胞、单核细胞开始迅速活化， 24、48小时后增多，主要分布于梗死灶周围，缺血72小时后不仅 梗死灶周围，梗死区内也可见阳性细胞。大量研究发现TNF一仅 是介导脑缺血损伤的重要的炎性介质，也有作者发现TNF—a主 要是由活化的小胶质细胞分泌的，本研究也发现脑缺血后TNF一 仅阳性细胞增多并与活化小胶质细胞及单核细胞分布区域基本相 似。目前抑制炎症反应制剂较多，但应用于脑缺血治疗的却很少。 肝素作为抗凝剂及抗血栓形成剂用于临床已60余年，近期大量研 究发现肝素是强有力的抗炎制剂。治疗机制与其对免疫反应及炎 性反应的抑制有关