马流感病毒多重RT—PCR检测方法的建立.pdfVIP

动物医学进展，2008，29(11)：28—31 ProgressinVeterinaryM edicine 马流感病毒多重 RT—PCR检测方法的建立 郭 巍 ，戴伶俐 ，李雪峰。，周建华 ，相文华 ，沈荣显 。，刘 娣h (1．黑龙江省农业科学院东北林业大学博士后工作站 ．黑龙江哈尔滨 150001； 2．中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 兽医生物技术国家重点实验室大动物病研究室．黑龙江哈尔滨 150001) 摘 要：根据马流感病毒的M基因和HA基因的保守序列，设计 了两对引物，MF和MR为通用引物， 可以检测出H3N8和 H7N7亚型 EIV，目的片段 227bp，HF和 HR为 H3N8亚型特异性 引物，目的片段 595bp。利用这两对引物 ，通过对多重RT—PCR扩增条件的优化，建立了快速检测鉴别 H3N8亚型 EIV的 多重RT—PCR技术。特异性和敏感性试验结果表明，该技术可以用于EIV 的快速诊断和亚型鉴定。 关键词 ：马流感病毒 ；多重 RT—PCR；建立 中图分类号：$852．652 文献标识码 ：A 文章编号 ：1007—5038(2008)l1-0028—04 马流感病毒 (Equineinfluenzavirus，EIV)属于 病毒分离、血清学试验至今仍是针对马流感诊 A型流感病毒，引起马属动物流行性感 冒，还可感染 断和对 ElV进行定型普遍采用的方法，但这些方法 狗等动物Ll]。马流感病毒基因组包括 M基 因、HA 操作比较复杂，不能对病毒进行快速诊断，不利于马 基因和NA基 因在内的8个负链单股 RNA片段组 流感的及时有效防控L6]。聚合酶链反应(PCR)可以 成。其中M基因组序列高度保守，HA和 NA基因 在数小时内对某段基因进行扩大数百万倍。该技术 组则可变性很强 ，其某些位点的变异可导致不同抗 特异性强、敏感性高、检测快速 ，已被广泛应用于医 原性病毒 的出现。虽然流感病毒可 以分为 15个 学的各个领域。多重 PCR是一种特殊 PCR形式， HA亚型，9个 NA亚型，但是 ，目前为止，EIV 只发 其最突出特点是一次 PCR可同时检测多种基因，尤 现 H3N8和 H7N7两种亚型，从 2O世纪 90年代开 其适用于流感病毒 的诊断L7刚。本研究根据 RT～ 始 ，世界各地发现 的 E1V分离株均为 H3N8亚 PCR技术原理，根据 EIV只有两种 HA亚型的特 型 j，虽然不同分离株之间存在抗原漂移现象，但 点，拟建立 EIV多重 RT—PCR检测技术。 是 ，病毒各段基因的同源性均在 9O 以上 。 收稿 日期 ：2008—09—09 基金项 目：黑龙江省博士后资助项 目(I．RB05—383) 作者简介：郭 巍(1978～)．男．黑龙江哈尔滨人。博士．助理研究员。主要从事病毒及免疫学研究。*通讯作者 豢 垛 ．g-礤索唯索毒 杀牛靠靠啼书啼 杀毒崇毒杀毒韶谁条嗦赤 谍书 带 隶咄书牛 杀毒啼弗靠粜靠 啼求靠 书矗索 索 禾 索矗杀啼豢 条 拳 诳毒隶杀 谍枞 毒 采谁夺啼弗谁豢-4-鬻矗杂 士杀毒弗· [8] DrotetR，ThibauhS，DallaireS，ata1．Porcinedermatitisand dermatitisandnephropathysyndromeinGreadBritain[J]．Vet nephropathysyndrome，anoverview ofthedisease[J]．Sw Rec，2000，146：143． Hlth Prod，1999。6；283—285． [1O] 刘长明，危艳武，张超范 ，等．猪 圆环病毒 2型灭活疫苗免疫佐 [9] GreshamA，JacksonG，GilesN，eta1．PMWSandPorcine 剂的比较试验[J]．中国预防兽医学报．2007，29(9)：690—693． Hist0path0l0gyandPCR DiagnosisofPorcine DermatitisandNephropathySyndrome Q1Xin—yong，ZHANG Wei—yi，WA