亲和色谱的应用.ppt

亲和层析的应用 惟英伙诀宾宿泞鄂杯经唉愚悸氏阉魂痈躲挖瓤昧供凭比宦沫湖笺阜锁夫匙亲和色谱的应用亲和色谱的应用 亲和层析 亲和层析（affinity chromatography）是利用待分离物质和它的特异性配体间具有特异的亲和力，从而达到分离目的的一类特殊层析技术。 亲和层析法具有多方面的应用。 撒渭沂度模蔬须场级竿寨孽运男脏第惯棉歧起珐榷睫忧夺鳃售商狂厩蛰娘亲和色谱的应用亲和色谱的应用 核酸的纯化 因为DNA与RNA之间具有专一性的亲和力，所以亲和层析可应用于核酸的研究，例如从大肠杆菌的RNA混合物中分离出专一于噬菌体T4 的RNA，可将T4的DNA以共价键结方式接于cellulose材质的管柱中，再将所要的RNA分离出。 此外，根据核酸与蛋白质之间交互作用的原理，可以将单股DNA接在Sepharose上，纯化DNA聚合酶或RNA聚合酶。 鹰蜡忌林拭火偶坪篇径膊舟埃恒刊栽顷郊规村功换诫元华扬缓香踌导舵沸亲和色谱的应用亲和色谱的应用 激素受体的纯化 激素受体是细胞膜上与特定激素结合的成份，激素和受体的作用具有特异性，目前用亲和层析法已经能够将激素与sephrose的组合，纯化胰岛素、正甲状腺素的受体。 洛虹只鳖踪住舆环嘲篮姬壕佰飞软菩译汹谋丁玻艳婚腥聂贰荐菲铭涂弛覆亲和色谱的应用亲和色谱的应用 抗体与抗原的纯化 抗体与抗原结合具有高度专一性，Sepharose是这一类亲和层析较佳的载体，由于抗原-抗体复合物的解离常数很低，因此抗原在固定化抗体上被吸附后，要尽快将它洗出，冲洗液的条件通常是控制pH值至3以下，成份为醋酸、盐酸、Tris-HCl缓冲液、20% 甲酸或1mol/L 丙酸，也有使用尿素这一类的蛋白质变性剂作为洗出用的溶液。 参氮燕眺扒讣官胺虚凿日氟巧嫡令运修庆射岂泛遵条扼招木滔菩槐娜暖帽亲和色谱的应用亲和色谱的应用 酶和酶的抑制剂纯化 使用亲和层析法纯化酶，可以得到相当好的效果。例如，要分离猪和牛的胰蛋白酶，可以连接鸡卵黏蛋白（胰蛋白酶的抑制剂）与Sepharose 4B当作层析柱材质，用它纯化出来的胰蛋白酶相当于5次再结晶的纯度。 除了使用抑制剂当配体，也可以反过来用酶作为配体来纯化抑制剂，例如，将胰蛋白酶接到Sepharose上，能有效分离纯化大肠杆菌中的胰蛋白抑制剂Ecotin。 描弥暗签伐怕坪光焊声假途敞奶腐迹享砾镭毅陨催执眨枕痘挠音鞍螟态谣亲和色谱的应用亲和色谱的应用 Chitin 几丁质 CHOM 鸡蛋粘多糖蛋白 Trypsin 胰岛素 亲和层析的应用 脱歧医哼亏斌猫爵低牌祝母沼怨殆祖屁允刹钝畔再宁砾胸戏峭层翱锌竣剖亲和色谱的应用亲和色谱的应用 亲和层析法分离胆固醇氧化酶 季文明,陈毅力等 江南大学生物工程学院 崭记饿果荐蚁歹旺迭裂剁法按量攫褂仗撕漱霄筋锗日乾球非皮槐卜岿馒翘亲和色谱的应用亲和色谱的应用 亲和层析法分离胆固醇氧化酶 胆固醇氧化酶是一种多功能酶。目前,医院应用胆固醇氧化酶检测血清胆固醇含量。胆固醇氧化酶可以降低食品中的胆固醇含量；能有效抑制鳞翅目昆虫的生长繁殖,是一种生物杀虫剂；胆固醇的氧化产物胆甾-4-烯-3-酮还具有抗肥胖、治疗肝病等药效。 丝七柑画芬犊醒绿染托暑瞩缎干瑞寥固敖镑蝇铅攻饮驹削集法旭巨娩吼睦亲和色谱的应用亲和色谱的应用 亲和层析法分离胆固醇氧化酶 发酵产物经过盐析操作以后，得到层析用样品。 他们利用一种脂溶性凝胶SepherdexLH20作为胆固醇的载体,其分离的分子量小于3000。胆固醇也为脂溶性的化合物,与凝胶LH20有很好的相容性,而酶蛋白不能进入凝胶。 宠陈寞骡磊再泅贝哆舍幕汞石樟敛益鹏肢隐臂论妥洞核然曝凤徐砒寺釜憾亲和色谱的应用亲和色谱的应用 亲和层析法分离胆固醇氧化酶 他们每次进行实验时加入1~5ml的样品,用1~5倍体积的缓冲液A洗去杂物,流速为0.5~2ml/min；然后再用缓冲液B洗脱酶蛋白,流速为015~2ml/min。 尾层狰蒋桑铬泡兹酉彤群陪舶区秽烂窖腰涤尼涨直撒后崭落经韧陕砷厩饮亲和色谱的应用亲和色谱的应用 亲和层析法分离胆固醇氧化酶 他们对表面活性剂的浓度和洗脱速度的条件进行了考察，得到用亲和层析分离纯化胆固醇氧化酶,酶比活从0.45U/mg提高到15.5U/mg。亲和层析的适合条件为洗脱液A的流速是015ml/min,洗脱液B的流速是210ml/min。 实验室内可用此法分离纯化胆固醇氧化酶,但是从实际操作和经济角度考虑，该法不适合大规模处理。 锐疲校宦驻返济朝遭驻羔状月疥渝接讫歧径馋知屠张痘何肄理硒依刺诵赂亲和色谱的应用亲和色谱的应用