胰高血糖素样肽-1 的聚乙二醇定点修饰 - 马光辉组.PDFVIP

第 9 卷第 6 期 过 程 工 程 学 报 Vol.9 No.6 2009 年 1 2 月 The Chinese Journal of Process Engineering Dec. 2009 胰高血糖素样肽-1 的聚乙二醇定点修饰 1,2 1,2 1 1 1 张 磊 ， 翟艳琴 ， 雷建都 ， 马光辉 ， 苏志国 (1. 中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室，北京 100190 ；2. 中国科学院研究生院，北京 100049) 摘 要：采用分子量为 5 kDa 的单甲氧基聚乙二醇琥珀酰亚胺碳酸酯(mPEG-SC)修饰胰高血糖素样肽-1(GLP-1)，建立 了 GLP-1 的定点修饰反应及分离纯化工艺，考察了修饰反应各因素对单修饰产物得率及体外活性的影响，得到优化 修饰条件为：pH 7.5, 50 mmol/L Na HPO −NaH PO 缓冲液，GLP-1 浓度 1 mg/mL, PEG/GLP-1 摩尔比 2:1, 4 ℃下反应 2 4 2 4 1 h. 在此条件下，单修饰 PEG-GLP-1 得率达 50%. 反相高效液相色谱分离纯化所得单修饰产品纯度达 98%，体外活 性保留为未修饰 GLP-1 的 86%，其在 Sprague−Dawley 远交群大鼠体内的循环半衰期为 60 min，比原肽提高了20 倍. 关键词：胰高血糖素样肽-1 ；聚乙二醇；定点修饰 中图分类号：Q514.3; R915 文献标识码：A 文章编号：1009−606X(2009)06−1169−05 1 前 言 GLP-1 的活性中心，该位点的修饰将导致 GLP-1 失去全 部生物活性，而 Lys26 和 Lys34 远离活性中心，理论上， 胰高血糖素样肽-1(Glucagon-like Peptide-1, GLP-1) 修饰位点离活性中心越远，修饰产物对多肽活性的影响 能以葡萄糖浓度依赖方式促进胰岛素分泌，从而起到降 越小. 因此，设计一种修饰在 Lys34 位点的定点修饰策略 低血糖的作用，同时还具有增强胰岛β细胞功能并促进 并优化修饰反应过程，对 GLP-1 的活性保留是非常重要 其增殖的作用，不仅可使初治的 2 型糖尿病(Type 2 的. 此外，PEG 修饰产物的分离，尤其是单修饰与二修 Diabetes Mellitus, T2DM)患者的血糖恢复正常，而且对 饰或多修饰产物的分离较困难，定点修饰可实现单修饰 磺脲类药物治疗失效者也有降低血糖的作用，在 T2DM 产物的高效分离，并提高产物的均一性和稳定性. 治疗方面具有良好的应用前景，成为近年来糖尿病治疗 本研究以被马来酸酐保护了 Lys26 的 GLP-1 为原 药物的研究热点[1−3]. 但 GLP-1 是由 30 个氨基酸组成的 料，采用分子量 5 kDa 的单甲氧基聚乙二醇琥珀酰亚胺 多肽，分子量小(3 kDa)，易被体内二肽基肽酶-IV 降解， 碳酸酯(mPEG-SC)为修饰剂，对 GLP-1 进行定点修饰. 半衰期很短(2 min 左右)，易被循环系统清除，且具有免 考察了修饰反应条件对修饰过程和产物活性的影响，并 疫原性和抗原性，大大限制了其临床应用[4]. 聚乙二醇 考察了单修饰产物的体外活性、水溶液稳定性、动物体 (Polyethylene Glycol, PEG)化学修饰能有效延长药物半 内循环