根癌农杆菌介导的烟曲霉转化条件的优化.pdfVIP

西部医学2008年3月第2O卷第2期 Med J West China，March 2008，Vo1．20，No．2 261 根癌农杆菌介导的烟曲霉转化条件的优化 龙朝钦，邓 军，郝 飞。，钟白玉，周村建 (第三军医大学西南医院皮肤科，重庆400038) 【摘要】 目的 探讨根癌农杆茵介导烟曲霉的遗传转化及其影响因素。方法 构建根癌农杆茵二元载体PDHt／ SK，二元栽体转化根癌农杆茵，分别对共培养温度(23、24、25、26、27、28)℃、媒介(尼龙膜、硝化纤维膜、液相静王培养)、 共培养时间(12、24、36、48 h)、预培养加乙酰丁香酮与否、加入乙酰丁香酮的浓度(100~g／ml、200#g／ml、300~g／ml、 400／~g／m1)；分生孢子与根癌农杆茵的不同比例(1：1、1：10、1；100、1：1000)进行根癌农杆茵介导烟曲霉的转化，观察 上述条件下的根癌农杆茵介导的烟曲霉转化效率，用潮霉素抗性基因筛选转化子。结果 共培养温度、转化媒介、共培养 时间、共培养加入乙酰丁香酮不同的浓度、分生孢子与根癌农杆茵的不同比例均对根癌农杆茵介导烟曲霉转化效率产生 影响，但是预培养加乙酰丁香酮与否对根癌农杆茵转化烟曲霉的效率影响不明显。结论 根癌农杆茵可成功介导烟曲霉 的遗传转化，其转化过程受诸多因素的影响。 【关键词】 烟曲霉；根癌农杆茵； 潮霉素抗性 【中图法分类号】 R379 【文献标识码】 A 【文章编号】 1672—3511(2008)02 026卜04 Optimization of factors affecting genetic transformation of aspergillus fumigatus via Agrobacterium tumefaciens LONG Chao—qin，DENG Jun，HAO Fei，et al (Department of Dermatology，Southwest Hospital，Third Military Medical University，Chongqing 400038，China) [Abstract] Objective To discuss the factors affecting genetic transformation of aspergillus fumigatus via Agrobacterium tumefaciens．Methods We constructed binary vector pDHt／SK of Agrobacterium tumefaciens．The Agrobacterium tumefaciens—mediated transformation(ATMT)was conducted at different CO—cultivation temperature (23，24，25，26，27，28℃)，different transformat media(nylon，nitrocellulose filters，liquid phase cultivation)，different co-cultivation period(12，24，36，48h)，AS preincubation or not，different concentrations of AS in CO—cultivation(100~g／ ml，200／~g／ml，300／~g／ml，400tLg／m1)，CO—cultivation at different ratios of conidia to bacteria(1：1，1 l 10，1；100，1： 1 000)，to explore the tansformation efficiency．Hygromycin resistance cassette was used to select the positive transfo