论文螺旋藻抑菌活性成分研究.docVIP

1 前言 1.1 螺旋藻简介 螺旋藻(Spirulina)属蓝藻门（cyomophyta）颤藻科（Oscilatori-aceae），又称为蓝细菌[1]。是一种螺旋丝状、能够进行自养的多细胞藻体,其分布较广,可生长在土壤、沼泽、淡水、盐水、海水和温泉中,甚至在一些不适应其它生物生存的环境,如含高碱量的湖泊中也能很好地生长[2]。螺旋藻含有大量的活性物质,如蛋白质、多糖、粗脂肪、酚酸、维生素等[3]，能够广泛应用于医药、食品、能源、环境、动物饲料等领域[4]。 目前，对螺旋藻的应用主要集中在营养价值、医药效用、动物饲料等。近年来的大量研究表明，螺旋藻由于营养价值高、医疗保健功能突出，已经被广泛应用于食品、制药工业。有学者研究指出[5]，螺旋藻中蛋白质的含量高达 55～70%，氨基酸组成比例十分合理。刘志伟[6]介绍，多糖是螺旋藻抗疲劳作用的主要成分，它能减少蛋白质和其他含氮化合物的分解代谢，降低血清尿素氮的形成，提高肝糖原和肌糖原贮备能力，明显延长小鼠游泳运动的耐力时间，起到抗疲劳作用。周志刚等[7]报道，极大螺旋藻多糖抗衰老的机制主要是对于体内OH·自由基具有很强的抗氧化作用。螺旋藻在以上方面的研究和应用使得这一优质资源受到了国内外研究人员越来越广泛的关注据研究，植物中具有抑菌活性的有效成分结构类型有很多，例如生物碱类、黄酮类、挥发油等，基本涉及到了植物的各种成分[8]。在同一种植物中可能有不同或者相同的抑菌成分发挥着作用，在不同植物中，也可以含有不同或者相同的物质对微生物有抑制作用，即具有广泛的抑菌能力[9]。近几年来，许多专家学者也在植物的许多种类如石榴、蒲公英、艾蒿、苍耳、乌梅、香菜等方面做了抑菌性的研究，都表明植物源抑菌、杀菌剂在化学农药泛滥的今天有很大的研发价值目前对于藻类植物抑菌性研究主要集中在巨型海藻中[10]，关于微藻抑菌活性的研究却比较少[11、12]，在蔡[13]关于钝节拟丽藻的研究中表明钝节拟丽藻的抑菌效果较好，提取的办法简单易行，能够做为一种新的微藻类植物源杀菌剂开发利用。也有少量报道称螺旋藻的石油醚、乙醇、乙烷、乙酸乙脂等提取物及分离得到的物质能够有效地抑制细菌、霉菌等生长，如杜玲[14]采用管碟法研究了钝顶螺旋藻多糖的体外抗菌活性，研究表明20～40mg·mL螺旋藻浓度对痢疾杆菌、假单孢绿脓杆菌和变形杆菌均有一定的抑制作用关于藻类等植物活性成分的提取有很多方法，传统方法中最常见的是采用水蒸气蒸馏法和溶剂提取法[15]，而溶剂提取法又包括有浸提法和回流法。伴随着现代科技进步而发展起来的一些新的提取方法有破碎提取法、超声波提取法、微波提取法和超临界萃取法等。与传统的提取方法相比现代化的提取方法在提取效率和纯度方面都有了很大的提升 藻类植物有效成分的分离方法主要有膜分离法、柱色谱法、气相色谱法、高效液相色谱法、萃取法等。成分鉴定的方法有质谱法（MS）、红外光谱法（IR）、紫外-可见光谱法（UV/Vis）法，而近几年来，质谱通过与其他方法的连用如气象色谱的连用使得应用范围进一步扩大，气相色谱-质谱联用（GC-MS）已经成为鉴定有效成分结构中的最佳方法之一[13](2)对各溶剂提取部位针对大肠杆菌进行抑菌活性研究； (3)根据抑菌结果，对抑菌作用强的活性部位进行分离纯化； (4)对活性物质进行结构分析、鉴定。 2 材料与方法 2.1 试验材料与仪器 2.1.1 试验原料 干燥螺旋藻粉末 2.1.2 供试菌种 供试细菌：大肠杆菌（Escherichia coli）供试菌种由山西大学生命科学学院微生物学实验室提供。 2.1.3 培养基[16] （1）3.0g、蛋白胨10.0g、氯化钠5.0g、蒸馏水1000mL、加热融化pH值为7.4-7.6121℃、20min-4℃冷藏备用。 （2）3.0g、蛋白胨10.0g、琼脂粉15-20g、氯化钠5.0g、蒸馏水1000mL、加热融化，调节pH值为7.4-7.6,分装，高压湿热灭菌（121℃、20min-4℃冷藏备用。 2.1.4 试验试剂及药品 所需试剂药品见表1。 表1 试剂及药品 名称 规格 生产厂家 牛肉膏 BR 北京奥博星生物技术有限责任公司 蛋白胨 BR 北京奥博星生物技术有限责任公司 Agar - Japan 氯化钠 AR