胸腺淋巴细胞免疫血清制备的初步研究.pdfVIP

第21卷 第2期 浙江万里学院学报 Vo1．21 No．2 2008年3月 Journal of Zhejiang Wanli University March 20o8 胸腺淋巴细胞免疫血清制备的初步研究 陈永富 (浙江万里学院，宁波 315100) 摘 要：试验研究以猪胸腺淋巴细胞为完全抗原，采用一定的免疫程序致敏兔，刺激兔产生抗猪胸腺淋巴细胞的特 异性抗体，在30天后分离血清，免疫效价达到1：640，证明兔血清含有该特异抗体，免疫程序合理，抗体效价确实． 关 键 词：猪胸腺淋巴细胞；免疫程序；抗淋巴球蛋白 中图分类号：R 979．5 文献标识码：A 文章编号 1671—2250(2008)02—0078—03 收 稿 日期：2007—07—11 作 者 简 介：陈永富，浙江万晕学院生物与环境学院Ij#师． 现代的器官移植从1905年美籍法国外科医生阿历克西斯·卡雷尔的工作算起已有百年历史．从1954年 默里成功地完成第一例肾脏手术至2000年底，人类已进行了80万次各种器官移植…．在中国，自吴阶平教 授1960年施行首例临床移植以来，我国临床器官移植工作已有40余年的历史．至2001年底，中国大陆已 施行各种实质大器官移植41，590例次 】． 器官移植会出现排斥现象．移植排斥反应(transplantation refection)即移植抗原诱导的免疫应答所导致 移植物功能丧失或受者机体损害．目前，预防移植免疫的基本原则是预防用药、联合用药、适当选药和早期 用药．临床上常用的有甲基强的松龙(MP)和泼尼松龙；环孢素A(CsA)和他可莫司(FK506)；硫唑嘌呤 (Aza)和霉酚酸酯(MMF)，但都有不良反应．抗淋巴细胞抗体主要作用是针对性地破坏T淋巴细胞，抑制细 胞免疫反应 ，常用于临床治疗，主要副作用在于抑制免疫反应的同时，也抑制白细胞生成．抗淋巴细胞抗 体在免疫抑制治疗中占有重要地位，与化学免疫抑制剂交替或联合使用，可弥补各自的毒副作用带来的不 足．小鼠的胸腺细胞培养已获成功 1．我们拟利用猪胸腺淋巴细胞在体外培养，免疫实验兔子，制备抗淋巴 细胞抗体，为人淋巴细胞的体外培育增殖、抗体的制备进行探索 】． 1 材料与方法 1．1 材料 1．1．1 试剂 RPMI1640培养基，胎牛血清(特优级)为GIBCO公司产品；BPS粉剂、谷氨酰胺为日本进口国 内分装；胰蛋白酶为国内生产．其他试剂都是分析纯． 1．1．2 实验动物 浙江万里学院动物饲养场，2年龄公兔五只． 1．2 方法 1．2．1 完全培养液的配制 PRMI一1640 10．4g／L，Hepes2．7g／L，火活小牛血清200mL／L，青霉素100 O00IU／L， 链霉素100 O00IU／L，pH7．2． 1．2_2 抗原的制备 1．2．2．1 胸腺细胞的提取 在净化室里将猪的胸腺取出立即浸人事先配好的抗菌溶液(青霉素4 O00U／mL， 链霉素5 O00U／mL)中，浸泡15rain，再用抗菌溶液反复洗涤数次，最后用已灭菌的双蒸水洗2-3次，用剪刀 剪碎成1mm 左右(约需20rain)；剪的过程中要用基础培养液换洗3次；然后加人体积为胸腺细胞液7倍的 O．3％胰蛋白酶液进行吹打使之充分反应，然后在37℃的水浴锅里静置20rain成灰白色，停止消化，离心机 1 000转~rain的离心 1Omin，弃去}=清液，加人体积为7倍的完全培养液，吹打使之充分混匀，离心机1 000 第2期 陈永富：胸腺淋巴细胞免疫血清制备的初步研究 79 转／miIl的离心1Omin，再弃去上清液，重复一遍．最后加一定量的含有20％小牛血清的完全培养液，计数，最 终胸腺细胞的浓度为5xlO 个／mL． 1．2．2．2 胸腺淋巴细胞的培养 取5x106个／mL胸腺淋巴细胞 lmL，加入含有血清细胞完全培养液2mL的培养瓶中，放置在37~C的二 氧化碳培养箱中进行培养．5d后分离，1 000转／min的离心机离心 lOmin，去上清夜，加约7倍的完全培养 液，计数，最终胸腺细胞的浓度为5×10 个／mL，一20~C保存待用