0670-5-高温中性蛋白酶基因的克隆、表达及验证研究.pdfVIP

新疆农业科学 2008，45(5)：956—959 XinjiangAgriculturalSciences 高温中性蛋白酶基因的克隆、表达及验证研究 茆 军 ，一，王 玮2，张志东2，谢玉清2，罗淑萍 (1．新疆农业大学农学院，乌鲁木齐 830091；2．新疆农科院微生物所，鸟鲁木齐 830091) 摘 要：对地衣芽孢杆菌XJI9503高温中性蛋白酶基因进行 了克隆、测序及表达研究。以高温中性蛋白酶产 生菌地衣芽孢杆菌X3q9503基因组 DNA为模板，通过PCR扩增，获得特异性片段。经测序分析，其具有一个 942bp的蛋白酶完整阅读框。通过表达载体构建，获得质粒 pPL—tnp，并转化至蛋白酶缺失受体菌枯草芽孢 杆菌AB97013，经表达验证其蛋白酶最适作用温度和 pH与出发菌相符。证明研究获得了高温中性蛋 白酶基 因及表达质粒pPL一协p，并正确表达。 关键词：高温中性蛋白酶；克隆；表达；地衣芽孢杆菌；枯草芽孢杆菌 中图分类号：$188 文献标识码 ：A 文章编号：1001—4330{2008)05—0956—04 StudyontheCloning、ExpressionandFunctionalIdentification ofThermophilicNeutralProtaseGene MA0Jun ，WANGWeiz，ZHANGZhi—do ，XIEYu—qing~，LUOShu—ping (1．CollegeofAgronomy，XinfiangAgriculturalUnivenity，Urumqi830091，China；2．InstituteofApplied Microbiology，XdnjiangAcademyofAgriculturalSceinces，Urunuli830091，China) Abstract：The experimentwas conducted to study cloning sequence．expression and functional identificationofthermophilicneutralprotase(tnp)geneinthispaper．TheBacilluslieheniformisX]q9503 geneDNA was,producedasatemplatebythermophilicneutralpotase．Thefragmentencodingtripwasobtainedby amplifyingPCR-which showde andopenreadingframethrough sequencenaalysis．Theplasmid pPL—mpWas obatinedbyB．subtilisvectorpPL608．Then theplasmidpPL—tnpWas introduced intotheprotease—deficient mutantB．subtilisAB97013toescretenadexpress，theenzymecharacteristicsforthetnpWas htesa】meas Bacillus lichenfiormiabouthteoptimum reactionconditonsoftemperaturenadpH，whichsuggestedthetripgeneWaS abtained，clonedandexpressedaccurately． Keywords：Th ermophilicNeutralProtase；cloning，expression；Bacillusf 硎 ；Bacillussubtilis 蛋白酶即蛋白水解酶(ProtelyticEnzymes，(EC3．4))，因其种类多样和水解活性专一，广泛用于洗涤、 食品、纺织和医药等行业。高温蛋白酶是指其最适作用温度在60~C以上的一类蛋白酶…1。高温蛋白酶 除了具有蛋白酶的共有特性外，还具有较高的催化效率、高温热稳定性、较长的半衰期、耐蛋白质变性 剂、耐有机溶剂等特性，具有较广泛的市场应用价值，是 目前使用的蛋 白酶的理想更新换代产品。因此 高温中性蛋 白酶的基因克隆、表达研究，有助于蛋 白酶的基因进化及耐热机制的研究 ，具有较为重要的 理论意义和