绿体色素提取和分离.pptVIP

实验四、叶绿素的提取、 分离及化学性质鉴定 * . 目的： 1.练习叶绿素提取和分离的方法 2.进一步了解叶绿素色素成分 * 实验目的： 掌握植物中叶绿体色素的成分分离和定性、定量分析的原理和方法。 一、提取、分离原理： 1、溶解性。 叶绿素和类胡萝卜素均不溶于水而溶于有机溶剂，常用95%的乙醇或80%的丙酮提取 * 2、吸附性。滤纸对Chlb、Chla、叶黄素、胡萝卜素的吸附能力不同(？)，当用石油醚作推动剂时，其在滤纸上的移动速度不同，可相互分离。 当用适当溶剂推动时，混合物中各成分在两相（固定相和流动相）间具有不同分配系数，所以移动速度不同，一定时间后可将各种色素分离 * 材料:新鲜植物叶片 器具：研钵一个，漏斗一个，刻度试管两支，剪刀一把，长滴管一个，培养皿(直径9cm)一个，圆形滤纸（11cm和7cm)各一张，滤纸条一张 试剂：95%乙醇，石油醚 * 步骤： 1.色素提取（乙醇粗提液） a.取新鲜叶片洗净擦干，去中脉 称1g左右 剪碎于研钵 b.研钵中加3-5ml 95%乙醇研磨成匀浆 过滤于刻度试管 残渣用少许乙醇冲洗一并过滤 定容至10ml 注：研磨用石英砂或SiO2以利于充分研磨，加入CaCO3以保护叶绿素。 * 2.荧光观察 将乙醇提取液试管放于太阳光下观察反射光和透射光下的颜色 现象：透射光下呈绿色，反射光下呈红色为叶绿素荧光 * 荧光观察 * 3.色素萃取（石油醚提取液） 取乙醇提取液5ml与另一支试管 加2ml石油醚摇荡 静止片刻上层深绿色为石油醚提取液 注：用丙酮提取会更好些，各色素在石油醚中溶解度不同 * 乙醇溶液 石油醚萃取溶液 * 4.色素分离 a.将（11cm)圆滤纸中间剪一小圆孔 取滤纸条捻成紧实芯一端插入圆滤纸中心（孔缘与纸芯紧贴且露出少许，最好相平） 用长滴管吸少许石油醚提取液滴于纸芯上端 待风干后再滴加几次。 * 点样 * b.将盛有石油醚的内盖（不要过满）放于培养皿中央 将插上纸芯的滤纸放在培养皿上纸芯下端浸入石油醚 迅速盖好培养皿。 c.推动剂前缘接近滤纸边缘时取出滤纸，风干可见分离色带，用铅笔标出各种色素位置和名称 注：带宽和移动速度说明？ * 层析结果，表明色素位置 * 二、取代作用 原理：在酸性或加温条件下，叶绿素卟啉环中的Mg++可依次被H+和Cu++取代形成褐色的去镁叶绿素和绿色的铜代叶绿素。 H+取代呈褐色 Mg2+, Cu2+ (Zn2+)取代H+ 呈绿色 * 实验步骤 取4ml色素提取液，加入1滴1N HCL，观察溶液颜色变化，再用玻棒蘸取少许醋酸铜粉末加入溶液，在65度水浴锅中加热5min,观察颜色变化。 。 * 左：正常叶绿素 中：去镁叶绿素右：铜代叶绿素 * 作业： 1.写实验报告，把分离开的四种色素的滤纸贴在实验报告上，并注明色素名称。 2.说明叶绿素溶液中加盐酸和醋酸铜后的颜色变化。 思考题： 铜代叶绿素还有荧光现象吗？为什么？ * *