项目1-3 黄色短杆菌培养基的制备、灭菌和优化 - 天津职业大学.ppt

不同微生物对营养物质的要求各不相同。因此，配制培养基要根据微生物的营养特点。一般，培养细菌常用牛肉膏蛋白胨培养基，培养放线菌常用淀粉培养基，培养霉菌常用马铃薯培养基，培养酵母菌常用麦芽汁培养基(或麦芽糖、蛋白胨培养基)。 培养基除了要满足微生物生长所要求的各种营养物质外，还应保证微生物所需要的其他生活条件，如适宜的酸碱度，渗透压等，因此，根据不同种类微生物的要求，应将培养基调节到一定的pH范围，如细菌培养基中性偏碱，放线菌培养基偏碱，霉菌、酵母菌培养基偏酸。 根据研究的不同，可以将培养基制成固体、半固体和液体三种形式，固体培养基的成分与液体培养基相同，仅在液体培养基中加入凝固剂作支持物，通常加入1.5～2.0％的琼脂，半固体培养基加入0.3～0.5％琼脂作支持物，有时也可用明胶或硅胶作为凝固剂。 (6)灭菌高压蒸汽灭菌，一般培养基0.1MPa，20-30min，含糖培养基为0.05MPa，30min。 3.高氏1号(W/V)(培养放线菌用) 可溶性淀粉 2.0g FeSO4 0.001g K2HP04 0.05g 琼脂 2.0g MgS04·7H20 0.05g 蒸馏水 100mL KNO3 0.1g pH 7.6-7.8 NaCl 0.05g （二）培养基制作注意事项 4.分装培养塞时，注意不得使培养基在瓶口或管壁上端沾染，以免引起杂菌污染。 5.培养基的灭菌时间和温度，需按照各种培养基的规定进行，以保证杀菌效果和不损失培养基的必要成分，培养基灭菌后，必须放在37oC温箱培育24h．无菌生长方可使用。 （三）棉塞制作 （四）灭菌 ②将灭菌锅盖的排气管插入套筒侧壁的凹槽内，关闭灭菌锅盖旋紧螺栓，切勿漏气。 ③打开放气阀，加热，热蒸汽上升，以排除锅内冷空气，排气约5～10min，关闭放气阀。 （五）实验步骤 ⒈ 掌握微生物斜面培养基、种子培养基及发酵培养基的确定方法。 ⒉ 了解对已确定菌种的发酵条件进行优化的方法。 谢谢！ 制药微生物发酵技术 训练项目1 1 黄色短杆菌培养基的制备与灭菌 1.加热溶化过程中，要不断搅拌，以免琼脂或其他固体物质粘在烧杯底上烧焦，造成烧杯破裂，加热过程中所蒸发的水分应补足。 2.pH值必须按各种不同培养基的要求准确测定。 3.所用器皿要洁净，勿用铜质和铁质器皿。保证容器外壁无水。 制药微生物发酵技术 1 黄色短杆菌培养基的制备与灭菌 训练项目1 制药微生物发酵技术 1 黄色短杆菌培养基的制备与灭菌 训练项目1 棉塞可过滤空气，防止杂菌侵入并可减缓培养基水分的蒸发，所以正确地制备棉塞是培养基制备中重要的一环。正确的棉塞是形状大小，松紧应与试管(或三角烧瓶)完全适合。过紧时妨碍空气流通，操作不便；过松时，空气会毫无障碍地进入试管(或三角烧瓶)中，达不到过滤杂菌的目的。棉塞过小往往易掉进试管内。正确的棉塞头较大，约有1/3在外，2/3在试管内。 制药微生物发酵技术 1 黄色短杆菌培养基的制备与灭菌 训练项目1 制药微生物发酵技术 1 黄色短杆菌培养基的制备与灭菌 训练项目1 目前，有条件的实验室已使用.塑料试管帽、金属试管帽、硅胶泡沫塞替代棉塞，此处介绍棉塞的制作，以备不时之需。 制药微生物发酵技术 1.培养基的高压蒸汽灭菌 ①需灭菌的物品(分装在试管、三角烧瓶中的固、液体培养基)，棉塞、硅胶泡沫塞等用防潮纸包好(防止锅内水汽把棉塞淋湿)，放人灭菌锅内的套筒中。摆放要疏松，不可太挤，否则阻碍蒸汽流通，影响灭菌效果。 训练项目1 1 黄色短杆菌培养基的制备与灭菌 训练项目1 1 黄色短杆菌培养基的制备与灭菌 制药微生物发酵技术 ④关闭放气阀后，整个灭菌锅成为密闭状态，而蒸汽又不断增多，这时压力和温度都上升，当温度升至121oC，压力达0.1MPa时，保持20～ 30min，即达到灭菌目的。 ⑤灭菌完毕，待压力自然降至“0”时，打开放气阀，注意不能打开过早，否则突然降压致使培养基冲腾，使棉塞、硅胶泡沫塞沾污，甚至冲出容器以外。 ⑥打开灭菌锅盖，取出已灭菌的器皿及培养基。 训练项目1 1 黄色短杆菌培养基的制备与灭菌 制药微生物发酵技术 2.干热灭菌法 常用于空玻璃器皿的灭菌，但凡带有橡胶或塑料的物品、液体及固体培养基等，都不能用于干热法灭菌。进行灭菌时，先将要灭菌器皿(培养皿、吸管的包装方法见示范)包好，放入电热烘箱内，调节温度至160～170oC，维持1～2h(当温度升至80oC以上切勿打开烤箱，以免引起玻璃器皿破裂和火灾)。灭菌后，当温度降至30～40oC时，打