蒙药白脉散组分库的建立及神经保护有效成分组的研究.pdf

摘 要 缺血性脑卒中严重危害人类健康，神经病变是其特征之一，临床 缺乏理想药物，神经保护剂的研究具有重要意义。脑卒中属于蒙医“白 脉病”的范畴，蒙医在数千年临床实践的基础上积累了大量宝贵的用 药经验。其中，白脉散为治疗缺血性脑卒中的经典蒙药复方，亟待发 掘和研究。 本论文以“有效成分组”理论为指导，以蒙药白脉散为研究对象， 以获得白脉散有效成分组为研究方向，采用快速制备技术和活性组分 快速筛选方法，获得白脉散神经保护活性组分，并在分子和细胞水平 研究其活性和作用机制。 采用水提醇沉法制备白脉散提取组分2个，采用溶剂萃取法制备 白脉散溶剂分配组分4个，创新性采用闪式柱色谱线性梯度洗脱法划 段分离，制备白脉散色谱组分69个，从而获得白脉散全组分，构建 了白脉散组分库。采用高效液相色谱法评价闪式柱色谱分离效果，结 果显示，闪式柱色谱依照物质在加压条件下与硅胶吸附力的不同，对 复方提取物进行了有效分离与富集，各组分相对简化，可用于活性筛 选。采用高效液相色谱法对组分进行色谱表征、结合对照品确定复方 中部分活性成分的分布情况。 采用二苯代苦味肼基自由基(DPPH)法建立抗氧化活性的高通 量筛选模型，对复方全组分进行筛选。组分F2．5～F2．18清除自由基 活性高于阳性药依达拉奉，可能为复方抗氧化活性组分，其中F2．5 的主要成分为没食子酸。 and 建立原代神经元缺糖缺氧复供(oxygen-glucosedeprivation biloba extract，EGb)，可能为复方神经保护活性组分。 取物(Ginkgo 谱分析表明，组分F2．15为含有多种成分的复合物，其良好的体外神 经保护活性可能与其多成分配比有关。 综合以上筛选结果，组分F2．15、F2．52、F5同时具有较高的自 由基清除活性和对缺糖缺氧神经元的保护活性，提示其属于蒙药白脉 散有效成分组的组成部分。 对实验所得活性最好的组分F2—15进行神经保护机制研究。F2．15 在30～70 lag／mL范围内具有神经保护活性，在40pg／mL时活性最高， 可显著抑制OGD／R损伤引起的神经元严重损伤，使细胞活力提高、 乳酸脱氢酶漏出减少、细胞形态得到改善、凋亡与坏死细减少。实验 显示，F2．15可降低胞内瞬时钙超载和活性氧水平，抑制线粒体膜电 抑制细胞凋亡，从而作用于钙超载．线粒体．凋亡的神经元损伤通路各 个环节，从而对神经元发挥保护作用。 此外，本课题采用与白脉散复方相同的方法，对白脉散的主药诃 子进行了组分制备与活性筛选，获得诃子提取组分2个，溶剂分配组 分3个，色谱组分60个，构建了诃子组分库，其中，组分HZ2．71～ H么2—9l、HZ2—93～H么2—96、H么3-98一-HZ3-l06、H么3-l09--7HZ3-l1’7、 HZ4．1 护活性组分。HZ2．80是兼具强抗氧化活性与神经保护活性的诃子代 表性组分。实验结果表明，诃子在蒙药白脉散抗脑缺血神经病变方面 应起到重要作用，诃子的某些成分应属于白脉散有效成分组的部分组 分。 综上所述，本实验创新性地将闪式柱色谱分离技术与体外筛选技 术相结合，用于民族大复方的研究，具有可行性与快速、有效性。发 现了白脉散的体外抗脑卒中神经病变有效组分，并验证其代表性组分 F2．15通过作用于神经元钙超载．线粒体．凋亡通路发挥神经保护作 用。课题一方面为民族药物白脉散的开发提供关键实验数据，一方面 为民族大复方药效物质基础研究提供一种新思路和新方法，可推广应 用于类似研究领域。 关键词蒙药大复方，有效成分组，闪式柱色谱，神经元，缺血缺氧 复供 ABSTRACT Ischemics仃okeisaseriousdisease humanhealthandlife． endangering Ideal for drug ischemicisstilllacked isoneofits