中间锦鸡儿cimybj2基因克隆及表达分析cloning and expression .pdf

Online system: 农 业 生 物 技 术 学 报 Journal of Agricultural Biotechnology 2014, 22(12): 1514~1524 DOI: 10.3969/j.issn. 1674-7968.2014.12.006 中间锦鸡儿CiMYBJ2基因克隆及表达分析 1 1 1 1 2 3 1 1* 邢丹丹 韩晓敏 冯宗琪 杨杞 齐力旺 刘福军 王瑞刚 李国婧 1 内蒙古农业大学生命科学学院，呼和浩特010018 ；2 中国林业科学研究院林业研究所，北京100091；3 内蒙古赤峰市松山区安庆沟林场， 赤峰024000 *通讯作者，guojingli@ 摘 要 MYB 转录因子是植物体内最大的转录因子家族之一，参与植物生长发育的调控、对逆境的响应 等生理过程。本研究通过RACE 技术从中间锦鸡儿(Caraganaintermedia) 中克隆了一个MYB 转录因子 CiMYBJ2(GenBank 登录号：KJ937783) ，并对其在植物中的表达及其启动子进行了初步研究。本研究克隆 得到该基因cDNA 全长1 368 bp ，3UTR 长196 bp ，5UTR 长203 bp 。其中开放阅读框长969 bp ，编码一个 含322 个氨基酸的亲水蛋白。gDNA 序列长1 285 bp ，有2 个内含子和3 个外显子。采用实时荧光定量 PCR 技术分析了CiMYBJ2的表达模式，结果发现，在高温、脱水、NaCl 、干旱等处理条件下，CiMYBJ2基因 对不同胁迫均有响应。在高温处理后，CiMYBJ2基因的表达量在1 和3 h 明显降低，之后维持一个较低 值，在不同时间点基因表达量与0 h 相比差异均达到极显著水平(P＜0.01) ；在脱水处理1 h 后CiMYBJ2基 因的表达量上升，且与0 h 相比差异极显著(P＜0.01) ，然后逐渐降低，在3 h CiMYBJ2基因的表达量与0 h 相比差异不显著(P＞0.05) ，在8 和12 h 该基因的表达量与0 h 相比差异均达到极显著(P＜0.01) ，在24 h 的 表达量是0 h 的一半，且差异显著(P＜0.05) ；在NaCl 处理1 h 后CiMYBJ2基因的转录水平开始增加，3 h 达 到最高，之后总体呈下降趋势，在8 h 表达量最低，在1、3、8 和24 h 该基因的表达量与0 h 相比差异极显著 (P＜0.01) ，在12 h CiMYBJ2基因的表达量与0 h 相比差异不显著(P＞0.05) ；干旱处理6 d 后，CiMYBJ2基因 的表达量上升，之后一直下降，且与0 d 相比差异达到极显著水平(P＜0.01) ，15 d 表达量最低。研究结果 暗示CiMYBJ2基因可能在植物对胁迫的响应过程中起作用。利用染色体步移技术克隆了中间锦鸡儿 CiMYBJ2基因启动子序列，长度为873 bp ，分析显示，该启动子具有响应多种非生物胁迫的顺式作用元 件。研究结果为进一步研究CiMYBJ2基因功能和表达调控提供了依据。 关键词 中间锦鸡儿，CiMYBJ2基因，实时荧光定量PCR ，启动子 Cloning and Expression Analysis of CiMYBJ2 Gene from Caragana intermedia XING Dan-Dan1 HAN Xiao-Min1 FENG Zong-Qi1 YANG Qi1 QI Li-Wang2 LIU Fu-Jun3 WANG Rui-Gang1 LI Guo-Jing1* 1 College of Life Sciences, Inner Mongolia Agricultural University, Hohhot 010018, China; 2 Research Institute of Forestry, Chinese Academy of Forestry, Beijing 100091, China; 3 Anqing forest farm, Songshan