家蚕胚胎发育时期的蛋白质变化及构造分析 - 黄金科学技术.pdfVIP

遗 传 学 报，26(6);627-633,1999 ActaGeneticaSinica 家蚕胚胎发育时期的蛋白质变化及构造分析 钟 伯 雄 浙（江大学蚕学系 杭州 310029) 摘要 采用蛋白质双向电泳技术及蛋白质氨基酸序列分析技术，从蛋白质水平研究了家蚕 胚胎发育时期的基因表达情况。结果表明，从家蚕临界期胚胎直到点青期胚胎的较长一段时 间内，蛋白质的双向电泳图谱变化不大，匹配蛋白质斑点比率达63.0%,卵特异性蛋白质，30K 蛋白质的含量很大。由点青期胚胎到转青期胚胎，再到蚁蚕期，胚胎发育的时间虽然很短，但 蛋白质双向电泳图谱的变化却很大，匹配蛋白质斑点比率下降，偏酸性蛋白质明显增多，卵特 异性蛋白质、30K蛋白质的含量逐渐消失，类似于幼虫血液蛋白、烯醇化酶蛋白、以及超氧化物 歧化酶蛋白的基因被激活和表达。 关键词 家蚕，胚胎发育，蛋白质图谱分析，蛋白质序列分析，基因表达 分类号 Q71 昆虫是生物界最庞大的家族，其种类约占所有生物种类的四分之三。家蚕归属于鳞 翅目，是卵期滞育的全变态昆虫。滞育的蚕卵经过低温或盐酸等理化因素的处理，可以解 除滞育进人生长发育’【］。家蚕胚胎解除滞育进人生长发育的过程，是家蚕基因组从休止到 激活，进人顺序表达的一系列生理生化反应的结果体现，而有关这一方面的研究尚未见报 道。蛋白质是结构基因表达的直接产物，通过对蛋白质的研究，可直接了解结构基因激活 表达的情况。利用蛋白质变性情况下的等电点和分子量这两个不同特性达到对蛋白质进 行分离目的的蛋白质双向电泳技术，具有很高的分辨能力和很好的重演性2[)。结合蛋白质 氨基酸序列分析和同源性蛋白质检索，可了解蛋白质的生物学功能[31［。一次双向电泳结果 可观察到很多蛋白质斑点，有利从整体上了解结构基因激活表达的情况。本文通过对家 蚕胚胎发育时期的蛋白质变化及相应蛋白质的构造分析，从蛋白质水平初步揭示了家蚕 基因组的激活表达情况，对家蚕的分子生物学、家蚕的胚胎发育生理学的研究有一定作 用，对其他生物的相应研究也有一定参考价值。现将研究结果简要报道如下。 1材料和方法 1.1实验材料 家蚕B（om勿wmoriL.）实际生产应用品种著松X皓月和薪杭X科明。 1.2 蛋白质样品制备 将2品种的越年卵在25℃条件下催青，取不同胚胎发育时期的 蚕卵1g、胚胎发育终了期— 蚁蚕0.5g，按参考文献 2［1的方法提取蛋白质试样，双向电 泳，考马斯亮蓝8250染色。 1.3蛋白质电泳图谱分析 采用PharmaciaBiotech公司开发的ImageMaster2DElite 本文于1998-05-04收到，1998-10-26修回 本研究得到浙江省教委回国人员科研基金、浙江农业大学人才基金、日本文部省国际合作科研基金部分资助 628 遗 传 学 报 26卷 软件，对蛋白质的等电点、分子量、蛋白质含量、以及不同胚胎发育时期的蛋白质匹配斑点 进行分析。斑点检测时的参数设定为：Sensitivity180,Operatorsize31,NoiseFactor5, BackgrFactor0。等电点和分子量的标准确定采用内外标结合法[2]［0 1.4 蛋白质N末端的序列分析 参照Zhong等[3]［方法。 1．5 氨基酸序列的同源性分析 通过 INTERNET网络上的FASTA SearchService和 BLASTSearchService，将测得的蛋白质序列与Swiss-Prot,PIR,GenBank和PRF4个数据 库中存在的蛋白质序列进行了同源性分析。 2 结果与分析 2.1家蚕胚胎发育过程中的蛋白质变化 将家蚕不同胚胎发育时期的蛋白质，采用双 向电泳，结合ImageMaster2DElite进行了图谱分析。结果显示，相同胚胎发育时期的蛋 白质图谱特征稳定，不同胚胎发育时期之间的蛋白质图谱相互间存在差异。此结果在多 次实验中得到重复证实。现将蓄松x皓月的临界期胚胎 a（)、点青期胚胎 b（)、转青期胚胎 (c)、以及蚁蚕d（)的电泳图谱列于图版I。由ImageMaster2DElite检测到的蛋白质斑点 的分子量、等电点、以及蛋白质含量的结果列于表1。表 1中的部分蛋白质，在 “匹配斑点” 一