尿刊酸修饰的壳聚糖介导野生型p53基因转染对人肺腺癌细胞系h1299 .pdfVIP

学 报 ４４０ ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎａＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　２００９，４０（５）：４４０－４４４ 尿刊酸修饰的壳聚糖介导野生型ｐ５３基因转染 对人肺腺癌细胞系Ｈ１２９９增殖和凋亡的影响 １ １ １ １ ２ 王　伟 ，姚　静 ，周建平 ，李夷平 ，陶　磊 １ ２ （中国药科大学　 药剂学教研室；生理学教研室，南京２１０００９） 摘　要　目的：研究尿刊酸修饰的壳聚糖（ＵＡＣ）介导野生型ｐ５３（ｗｔｐ５３）基因转染对人肺腺癌细胞系Ｈ１２９９（ｐ５３基因 缺失）的增殖抑制和凋亡诱导作用。方法：ＵＡＣ介导ｗｔｐ５３基因转染Ｈ１２９９细胞后，采用荧光显微术、ＲＴＰＣＲ法和Ｗｅｓｔ ｅｒｎｂｌｏｔ法分别检测细胞内绿色荧光蛋白（ＧＦＰ）、ｗｔｐ５３ｍＲＮＡ和蛋白的表达，并通过 ＭＴＴ法分析基因转染对细胞的生长 抑制作用，ＤＡＰＩ染色法和琼脂糖凝胶电泳法评价其对细胞的诱导凋亡作用。结果：ＵＡＣ介导ｗｔｐ５３基因转染Ｈ１２９９细胞 后，大量细胞表达ＧＦＰ，细胞内ｗｔｐ５３ｍＲＮＡ和蛋白表达水平明显上调，细胞生长受到显著地抑制，凋亡细胞数量明显增 加，并有清晰的ＤＮＡ梯状条带出现。结论：ＵＡＣ介导ｗｔｐ５３基因转染能够显著地抑制人肺腺癌细胞系Ｈ１２９９的增殖，并诱 导其凋亡。 关键词　尿刊酸修饰的壳聚糖；野生型ｐ５３；人肺腺癌细胞系；增殖；凋亡 中图分类号　Ｒ９６３　　文献标识码　Ａ　　文章编号　１０００－５０４８（２００９）０５－０４４０－０５ Ｅｆｆｅｃｔｓｏｆｕｒｏｃａｎｉｃａｃｉｄｍｏｄｉｆｉｅｄｃｈｉｔｏｓａｎｍｅｄｉａｔｅｄｗｉｌｄｔｙｐｅｐ５３ｇｅｎｅｔｒａｎｓ ｆｅｃｔｉｏｎｏｎｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄａｐｏｐｔｏｓｉｓｏｆｈｕｍａｎｌｕｎｇａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａｃｅｌｌｌｉｎｅ Ｈ１２９９ １ １ １ １ ２ ＷＡＮＧＷｅｉ牞ＹＡＯＪｉｎｇ牞ＺＨＯＵＪｉａｎｐｉｎｇ 牞ＬＩＹｉｐｉｎｇ牞ＴＡＯＬｅｉ １ ２ ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ牷ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙ牞ＣｈｉｎａＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ牞Ｎａｎｊｉｎｇ２１０００９牞Ｃｈｉｎａ Ａｂｓｔｒａｃｔ　Ａｉｍ牶Ｔｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｒｏｌｅｓｏｆｕｒｏｃａｎｉｃａｃｉｄｍｏｄｉｆｉｅｄｃｈｉｔｏｓａｎ牗ＵＡＣ牘ｍｅｄｉａｔｅｄｗｉｌｄｔｙｐｅｐ５３牗ｗｔ ｐ５３牘ｇｅｎｅｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎｉｎｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄｉｎｄｕｃｉｎｇｔｈｅａｐｏｐｔｏｓｉｓｏｆｈｕｍａｎｌｕｎｇａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ ｃｅｌｌｌｉｎｅＨ１２９９牗ｐ５３ｎｕｌｌ牘Ｍｅｔｈｏｄｓ牶ＦｏｌｌｏｗｉｎｇＵＡＣｍｅｄｉａｔｅｄｗｔｐ５３ｇｅｎｅｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎｉｎＨ１２９９ｃｅｌｌｓ牞ｔｈｅｅｘ ｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｇｒｅｅｎｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｐｒｏｔｅｉｎ牗ＧＦＰ牘牞ｗｔｐ５３ｍＲＮＡａｎｄｐｒｏｔｅｉｎｗａｓａｓｓａｙｅｄｂｙｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ牞 ＲＴＰＣＲａｎｄＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ牞ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ牷ｃｅｌｌｇｒｏｗｔｈｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｗａｓａｎａｌｙｚｅｄｂｙＭＴＴａｓｓａｙ牷ａｎｄａｐｏｐｔｏｓｉｓｗａｓ ａｓｓｅｓｓｅｄｂｙＤＡＰＩｓｔａｉｎｉｎｇａｎｄａｇａｒｏｓｅｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓＲｅｓｕｌｔｓ牶ＵＡＣｍｅｄｉａｔｅｄｗｔｐ５３ｇｅｎｅｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎｉｎ Ｈ１２９９ｃｅｌｌｓｒｅｓｕｌｔｅｄｉｎｔｈｅａｐｐｅａｒａｎｃｅｏｆｍａｎｙｃｅｌｌｓｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇＧＦＰ牞ｔｈｅｎｏｔａｂｌｅｉｎｃｒｅａｓｅｓｏｆｗｔｐ５３ｍＲＮＡａｎｄ ｐｒｏｔｅｉｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｌｅｖｅｌｓ牞ｔｈｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｃｅｌｌｕｌａｒｇｒｏｗｔｈｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ牞ｔｈｅｏｂｖｉｏｕｓｉｎｃｒｅａｓ