核糖体蛋白rps6在核仁中的定位与其磷酸化无关 - 中国细胞生物学学报.pdfVIP

中国细胞生物学学报 Chinese Journal of Cell Biology 2012, 34(2): 113– 119 http ://www.cj 研究论文 rpS6 核糖体蛋白 在核仁中的定位与其磷酸化无关 , 12 1 1 1 1 1 1* 张　朵 　高丽华　邵　勇　郗永义　胥照平　陈惠鹏　胡显文 1 2 ( 军事医学科学院生物工程研究所, 北京100071; 南京军区福州总医院实验科, 福州350025) 摘要 核糖体蛋白S6(rpS6)是核糖体小亚基40S的一个组成成分。在该研究中, 利用免疫荧 光和邻位连接技术证明rpS6不仅是核糖体小亚基的组成成分, 而且还可与核仁中的U3核蛋白复合 体的标志性蛋白Mpp 10共定位并且存在相互作用。rpS6蛋白的C端有5个丝氨酸磷酸化位点, 为了 研究rpS6蛋白在核仁中的分布是否与其磷酸化有关, 构建了rpS6蛋白的两个突变体rpS6A和rpS6D 分别与EGFP和HA 的融合蛋白。rpS6A是将C端的5个丝氨酸位点全部突变为丙氨酸; rpS6D是将C 端的5个丝氨酸位点全部突变为天冬氨酸。研究表明: rpS6、rpS6A和rpS6D与EGFP和HA 的融合蛋 白均可分布在核仁中, 与内源性rpS6蛋白的分布情况一致, 说明rpS6蛋白在核仁中的定位与其磷酸 化无关, 为探索rpS6蛋白在核仁中的功能奠定了良好的基础。 关键词 核糖体蛋白S6; 邻位连接技术; U3核蛋白复合体 核糖体蛋白S6(rpS6) 由两个位于不同染色体上 酸位点全部突变为丙氨酸, 该蛋白在体内不能被磷 RPS6A RPS6B [1] C 5 rpS6D rpS6 C 5 的等位基因 和 编码 。 端有 个高度 酸化; 是将 蛋白 端的 个丝氨酸位点全 保守的丝氨酸磷酸化位点Ser235、Ser236、Ser240、 部突变为天冬氨酸, 该蛋白在体内虽然不能被磷酸 Ser244和Ser247[2-4] 。在mTOR-S6K-rpS6信号通路中, rpS6 rpS6A 化, 但可行使磷酸化蛋白的功能。将 、 和 rpS6 C rpS6D EGFP HA 蛋白 端的丝氨酸磷酸化位点可被其上游激酶 分别与 和 构建融合蛋白, 转染入高等 S6K rpS6 HEK293 磷酸化。磷酸化 蛋白的功能可能与细胞大 真核细胞 中, 利用激光共聚焦和免疫荧光实 小、糖代谢、蛋白质翻译等有关。一直以来, 研究 rpS6 rpS6A rpS6D EGFP HA 验观察 、 和 与 和 的融合蛋 rpS6 40S rpS6 结果均表明: 蛋白是核糖体 小亚基的组成成 白在核仁中的分布情况。我们推测: 蛋白很可 2002 Dragon [5]通过质