微小毛霉凝乳酶的分泌表达、产物纯化及鉴定 - 吉林农业大学学报.pdfVIP

吉林农业大学学 2011，05 Journal of Jilin Agricultural University E-mail:jlndxb@ 微小毛霉凝乳酶的分泌表达、产物纯化及鉴定* 1，2 1 3 1 2 1** 王景会 ，李玉秋 ，郑 丽 ，李倬琳 ,高 岩 ，杨贞耐 1.吉林省农业科学院农产品加工研究中心，长春 130033；2.吉林农业大学食品科学与工程学院，长春 130118；3.吉林大学农业与生物工程学院，长春 130024 摘 要：为将微小毛霉（Mucor pusillus ）凝乳酶采用基因工程的方法进行分子改造，获得适于乳品工业生产用的凝 乳酶，克隆到了微小毛霉凝乳酶基因，构建了酵母表达质粒pPIC9K ／M 。线性化后电击转入毕赤酵母GS115, 在甲 醇诱导下进行凝乳酶的初步发酵试验, 通过pH 反应及酶抑制反应试验证明，重组凝乳酶获得了分泌表达。 SDS分析表明重组凝乳酶的分子量约为46 kD, 与理论值（45.3 kD ）基本相符，培养基上清液中凝乳酶的活 性为311.8 SU/mL,纯化的总回收率为51.89 % ，纯度达到92% 。 关键词：凝乳酶; 分泌表达; 毕赤酵母 中图分类号：TS201.3 文献标识码：A 文章编号：1000-5684(2011) CNKI:22-1100/S1646.001 DOI: 网络出版地址： /kcms/detail/22.1100.s1646.001.html Secretory Expression，Purification and Identification of Rennet from Mucor pusillus 1，2 1 3 1 2 1 WANG Jing-hui ,LI Yu-qiu ,ZHENG Li ,LI Zhuo-lin ，GAO Yan, YANG Zhen-nai 1. Research Center of Agro-Product Processing, Jilin Academy of Agricultural Sciences, Changchun 130033,China; 2. College of Food Science and Engineering, Jilin Agricultural University , Changchun 130118,China;3. .College of Agriculture and Biological Engineering ，Jilin University ，Changchun，130024,China Abstract : The rennet from Mucor pusillus is one of the major sources of microbial rennet, but it has some defects compared with the bovine chymosin. Aspartic proteinases from fungi are usually more heat resistant. When these enzymes are used for cheese making, the residue of enzymatic activity after heat treatment(55℃ )following milk coagulation may still exist