小鼠b7一h4重组腺病毒的构建及鉴定 - 浙江大学学报.pdfVIP

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2017-09-02 发布于天津
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小鼠b7一h4重组腺病毒的构建及鉴定 - 浙江大学学报.pdf

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小鼠b7一h4重组腺病毒的构建及鉴定 - 浙江大学学报

Vol37 No 第37卷第5期浙江大学学报(医学版) 5 OF UNIVERSITY(MEDICALSCIENCES) 2008卑 JOURNALZHEJIANG 2008 http：∥www．journals．zju．edu．cn／med 小鼠B7一H4重组腺病毒的构建及鉴定闫佩毅，姚航平，钱韵，古丽娟，陶岚，张立煌 (浙江大学医学院免疫学研究所，浙江杭州310058) [摘要] 物学活性。方法：以RT—PCR方法从C57小鼠肺组织中扩增B7一H4全长基因并克隆到T栽体，然后测序鉴定。经XholI和EcoR mB7一H4／Ad。以RT—PCR及Western mRNA和蛋白的表达，并观察重组腺病毒感染的小鼠成纤维细胞(L929)对T细胞增殖和细胞因子表达的影响。结果：获得序列准确的mB7一H4基因并成功构建重组腺病毒表达质粒。转化AD-293 细胞获得重组腺病毒；细胞生物学实验证实，该重组腺病毒具有抑制CD3单抗诱导的T淋巴细胞的增殖和细胞因子的分泌。结论：成功构建具有免疫抑制功能的mB7一H4重组腺病毒。 [关键词]T淋巴细胞／免疫学；重组，遗传；腺病毒科／遗传学；转染；细胞增殖；细胞，培养的；质粒 392．1 [中图分类号]R [文献标识码]A[文章编号] Constructionandidentificationofrecombinantadenoviralvector B7一H4 encodinggene YAN Yun，GU Lan，ZHANG Li—juan，TAO Li—huang(Institute Pei—yi。YAOHang—ping，QIAN of of 310058，China) Immunology，CollegeMedicine，ZhoiangUniversity，Hangzhou the with constructrecombinantadenovirus B7一H4 [-Abstract]Objective：To containinggene XL andto its activities．Methods：ThemouseB7 system identifybiological full—length AdEasyTM RT—PCRfromC57mouseand intoTvector，thenverified 一H4 was by put by gene amplified lung I andEcoRV the wasinsertedinto withXhol B7一H4 sequencing．Digested gene pshuttle—CMW toobtainthe (PSC)．PmeI linearizedshuttle wastransformedintoE．coliBJ5