sulfolobus tokodaii strain 7 高温酸性α-淀粉酶基因在大肠杆菌中克隆 .pdfVIP

研究报告 Sulf olobus tokodaii strain 7 - 高温酸性α 淀粉酶基因 在大肠杆菌中克隆表达及其酶学性质* 1 1 2 1 ， ， ， 魏涛 孙浩 申玉龙 毛多斌 1 ( ， ，450002) 郑州轻工业学院食品与生物工程学院 河南郑州 2 ( ， ，250100) 山东大学微生物技术国家重点实验室 山东济南 Sulf olobus tokodaii strain 7 DNA ， PCR - 摘 要 以超嗜热古菌 基因组 为模板 通过 扩增高温酸性α 淀粉酶基因 ST0817 ， pET15b ， Escherichia coli BL21-CodenPlus (DE3)-RIL ， 将此基因克隆至表达载体 并转化大肠杆菌 获得重 。 、 ， ，SDS， 组大肠杆菌工程菌 通过热处理 镍柱亲和层析和分子筛层析 得到纯化重组酶 分析表明 该酶分子 53. 0 kDa 。 ， pH 75℃ 5. 5 ; pH ， 量为 酶学性质研究表明 该酶最适温度和 分别为 和 具有较强的热稳定性和 稳定性 85℃ 8 h 50% ， pH 5. 2 120 min 50% 。 ， 在 处理 保持 左右活力 在 处理 仍保持 活力 此酶对不同底物水解活性不同 ＞ ＞ ＞ - ＞ ＞ ＞ ; 、 直连淀粉 可溶性淀粉 支链淀粉 β 极限糊精 糖原 环糊精 普鲁兰糖 该酶对有机溶剂 变性剂和金属 离子具有一定抗性。 - ， ， ， 关键词 高温酸性α 淀粉酶 克隆 表达 酶学性质 - 高温酸性α 淀粉酶是淀粉制糖工业中重要的酶 1 材料与方法 ， 。 制剂 有着非常广泛的应用前景 发展淀粉制糖工业 也是解决当前淀粉生产积压的重要途径。淀粉水解 1. 1 菌株与质粒 2 ， - S. tokodaii strain 7 JCM (Japan 包括液化和糖化 个步骤 高温α 淀粉酶在液化过 嗜热古菌 购自 程中起关键作用，