天花粉蛋白c一端顺序的测定 - 上海有机化学研究所.pdf

化学学报 AOTA OHIMICA SrnICA 19M, 46 , 1119-112岳 天花粉蛋白 C一端顺序的测定 汪献铃张麟华孙小俭张丽青用乐惠永E (中国科学院上海有机化学研究所J 上海〉 采用阱解法、乙内航硫腮法和援肤酶法检测了天花粉蛋白的。-端氨基酸有二，分别为 Met 和 Ala 借计算机辅助的殷肤酶法，测定了天花粉蛋白 0-端顺序， I 其结果显示0-端是非均一的，有两个 末端p 分别为一ArgAsnAsnMetOH 和 -ArgAsnAsnMetAlaOH. 这些结论已经从天花粉蛋白的模 化辄降解物中获得游离的Ala，和从该蛋白的膜蛋白酶酶解物中分离得与该两顺序相符的两个碎片 而完全证实. 天花粉蛋白(T) 是传统中药天花粉的有效成份，是从葫芦科植物 (Ouou.rbi如sease) 括楼 J (TTichosa(1，伪es K如iZoωii Maxim)的块根中提出的一种蛋白质，它是中期娃振引产、抗早孕 和治疗其他有关妇科疾病的特效药物(lJ 关于 T 的 0-端氨基酸及其顺序以及一级结掏已见 扼要报道(1.-4J. T 的。-端氨基酸曾企图按一般化学方法(脐解法(5J和乙内酷硫腮法(6J) 和酶法 (竣肤酶法(7J) 检测，但结果复杂，出现不只一个末端氨基酸，所以试用了计算机辅助的竣肤酶 法得以解决了 T 的 0-端顺序问题.本文报告该研究的具体方法和结果. 实验 器材拨肤酶A(OPA) 用 Oamerian 公司商品.接肤酶Y(OPY) 和 TPOK-膜蛋白酶 系 Sigma 公司商品.接肤酶 B(OPB) 系 Boehringer Mannhein GmbH 公司商品.实验用结晶 天花粉蛋白∞由本所天花粉组提供.乙内酷硫腮丙氨酸和乙内酷硫腮甲硫氨酸按 Yamashi恤 方法合成(6:1 元水胁按文献[5J 制备.其他试剂系分析纯或重行纯化后使用. HPLO 用 E. Merok 的铝膜硅胶 60F • 聚酣胶薄膜和纤维素膜用浙江黄岩分析材料厂的产品.纸电泳用 254 纸系新华3 号.氨基酸微量分析用 LKB-4400 氨基酸分析仪.薄层层析用岛津08-910 双波 长扫描仪分析.计算机程序在 Orom臼nco Z-80 计算机上运行. 方法 氨基酸的组成分析按文献[8J 操作，手工顺序测定按文献[9] 中的 DABITOjPITO 双偶合法操作. 双向指纹图谱 纤维素蒲膜 20x20cm，点样，第一相为电泳.电极液为10:20:75:325 毗院-醋酸一丙自同一水， pH4.4， 400Vj20cm, 1. 5mA，电泳 2 h，吹干后进行第二相层析.展开 液为 40:60:12:48 日比盹-正丁晖-醋酸-水，层析 8h，吹干后用 0.005% 莹光胶显示. N-马来酷天花粉蛋白(MT)的制备(10J 称取100 mg T，榕于 12mLO.1M的(pH9)焦磷 酸铀缓冲液中r 分Jtt加入200mg 马来酸蹄，用 2MNaOH 调节 pH 到 9 左右， 1.5h 加完，再 继续反应0.5h，反应液对水透析 68h，不透析的残留液冻干后得MT. 脐解(5J 称取15皿gT 置于封管内，在 105。吼减压干燥 8h. 在干燥箱中，将 1mL 无水阱 0 加入封管，封闭封管，在 100 0 反应 12 h 后开管，抽干.残留物溶于 2mL 重蒸外，加入0.5 1987 年1q 月 6 日收到.本文附录存《化学学报b编辑部. • 1120.