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Total Correlation Spectroscopy (TOCSY) Homonuclear proton correlation within the same spin system. 理论上可给出被杂原子或季碳隔离的结构片段上每个质子与其它所有质子间的交叉峰信号，能够有效的确定连续质子化的结构片段，因此主要用于肽类和寡糖结构单元的分析鉴定。 Total Correlation Spectroscopy (TOCSY) Total Correlation Spectroscopy (TOCSY) COSY of Other Nucleis 在二维化学位移相关图谱中，有时一些预期的交叉峰可能不出现或信号强度很低。一般情况下，信号强度的准确判断比较困难，但是对以下两个因素必须特别注意。第一，如果一个自旋核（质子）与其它多个自旋核同时偶合，在一维图谱中，该自旋核的每个信号峰强度通常较低；在二维化学位移相关实验中，由于混合脉冲使自旋核的磁化矢量在与其偶合的其它自旋核的过度能态中重新分布，致使与具有复杂结构的多重峰相关的交叉峰信号强度显著降低。因此，这种自旋体系中虽然存在大的偶合，但不一定能够得到强的交叉峰信号。但是在实验中可以通过选择缩短数据采集时间，突出大偶合交叉峰信号强度。如果知道准确的偶合常数，也可以通过特殊的滤波技术，得到丢失的交叉峰信号。第二，如果与1/JAX比较，横向迟豫时间非常短，使磁化转移无法形成，从而降低交叉峰信号强度。 化学位移相关图谱中交叉峰信号的强度 由于在二维化学位移相关实验中，只需要观察自旋体系中自旋核之间的偶合关系，从而建立它们之间的连接关系，通常并不需要对每个信号的细微结果进行分析。尽管高分辨的二维化学位移实验能够给出偶合的多重峰的精细结构，但是需要很长的实验时间，同时得到的精细信息可以通过简单的一维实验得到。因此在二维化学位移相关实验中，并不需要很高的分辨率。 在二维化学位移相关实验中，最常见的一种不必要的实验时间浪费是在全谱范围进行化学位移相关测定，因为在很多情况下，图谱的较低磁场区域的信号较少或无信号，比如甾体和三萜化合物，大多数质子偶合出现在0-5 ppm之间；如果在0-10 ppm范围进行二维化学位移相关实验测定，将有大量的实验时间花费在不可能存在相关信号的5-10 ppm范围的数据采集上；同样，对于一些芳香化合物，偶合相关通常出现在6-9 ppm之间，因此，高磁场区域进行数据采集得不到任何信息，只是浪费实验时间。因此，在进行二维化学位移相关实验前，应根据一维实验的结果合理确定数据采集范围，以节省实验时间；尤其在进行高分辨二维化学位移相关实验时更为必要，可在一定实验时间内获得更高的图谱分辨率。 二维化学位移相关实验中的分辨率 * * 二维核磁 超复杂的一维核磁的解读－－－二维核磁 1H NMR Spectrum of Ubiquitin 二维核磁原理 Father of 2D NMR: Jeener, Belgium Main Developers: RR Ernst， (Switzerland), R Freeman (UK, Oxford) 常见二维核磁的功能 1H－1H COSY 2键或3键质子耦合 1H－1H TOCSY 具有连续的键合联系的质子耦合 1H－X HMQC，HSQC 通过质子观察1键异核耦合 1H－X HMBC 通过质子观察2或3键异核耦合，多用于13C X－X COSY 天然丰度大于20％的杂核之间的1键耦合 X－X INADEQUATE 低天然丰度的杂核之间的1键耦合 1H－1H NOE差谱 一维、二维NOESY、ROESY 空间上接近质子之间的耦合 常见二维核磁的功能 二维核磁原理 2D NMR is a domain of FT and pulsed spectroscopy + 1D + 1D = 2D 2D detect signals twice (before/after coupling) Same as 1D experiment 90o pulse Transfers between coupled spins 准备期(preparation)：主要任务使核处于热平衡状态或者在一次采样之后使自旋恢复到平衡状态。 演化期(evolution)：准备期建立起来的平衡态破坏之后核自旋在旋转坐标XY平面发生进动。进动的过程一般称为演化。t1是变化的。 混合期(mixing)：在演化期完成之后，可以选择测定已演化的磁化矢量，混合期有可能不存在，它不是必不可少的。 检测期(acquisition)（t2）：在检测期内以通常方式检出FID信息。 与t2轴对应的?2 是通常的频率轴，与t1轴对应