微生物遗传-2-复制.ppt

3 染色体及其复制 3.1 DNA分子的复制 3.2 原核生物的染色体及其复制 3.3 真核生物的染色体及其复制 3.1 DNA分子复制的特点 半保留复制 子代DNA分子 = 模板母链 + 新合成互补链 具有复制起点和复制方向 起点：Origin of replication (ori)，原核1个，真核多个， E.coli, 245 bp。 方向：双向或单向，5’→3’ 半不连续复制 复制方向5’→3’ 半不连续复制 3.2 原核生物染色体及其复制 原核微生物：细菌、放线菌和蓝细菌 3.2.1 组成 DNA是主要组分，占80%以上，其余为蛋白质和RNA 大多为一条共价闭合的环状DNA分子，少数多个环或线状。 大肠杆菌（E. coli）：4.7 Mb；枯草芽孢杆菌：4.2 Mb；根癌土壤杆菌：2个环状DNA，3.0 Mb和2.1 Mb； 3.2.2 细菌染色体的复制 相关酶类：DNA聚合酶、引物酶、连接酶和其它蛋白质 过程：起始（oriC, 包含有11个GATC序列 ）、延伸和终止（termination site: tecA） DNA聚合酶（DNA Polymerase） Pol I、pol II Pol III：DNA链延长的主要聚合酶。 复制的起始：解旋、解链 作用是解开、理顺DNA链，维持DNA在一段时间内处于单链状态；此过程消耗能量，2ATP/bp。 DnaA辨认起始点、DnaC协助DnaB结合在起始点并打开双链 ；SSB，单链结合蛋白。 拓扑异构酶（DNA旋转酶） DNA聚合酶Ⅲ全酶 全酶是由10种不同亚基组成的不对称二聚体。 核心酶起主要作用 同时完成前导链和后随链的合成 原核染色体复制的终止 ter序列(termination site) 22 bp，与终止蛋白（Tus蛋白）结合，使复制叉停止移动 terE, terD, terA和terF, terB, terC 复制方式：滚环复制；θ复制；D环复制 3.3 真核生物的染色体及其复制 3.3.1 组成和结构 染色质：线性DNA分子和组蛋白组成 核小体：由DNA和组蛋白组成的颗粒 染色质纤丝：螺旋管结构，染色质的二级结构 染色体：由纤丝进一步折叠形成的超螺旋环附着在邮费组蛋白组成的中央骨架，形成染色体。 3.2 真核染色体的复制 3.2.1生活周期 G1期、S期、G2期和M期，DNA复制只发生在S期。 复制的调控：起始许可因子 3.2.2 复制特点 有起始点，无终止点，双向 复制子相对较小 复制速度较慢 生长速度不同，启动的复制起始点的数量也不同。 3.3.1真核生物DNA聚合酶 原核和真核复制比较 端粒酶的作用 常规的真核生物DNA聚合酶同样不能完全复制染色体末端（端粒）。真核生物的端粒酶可以保持染色体的长度。 端粒酶在肿瘤治疗中的意义 迄今为止,端粒酶已在大多数肿瘤细胞中检测到,而且有着很高的阳性率,如神经母细胞瘤(94％)、乳腺癌(93％)、大肠癌(93％)、肝癌(85％)、肺癌(80％)等,而在邻近的正常人体组织或良性肿瘤中多为阴性或极低表达,因此端粒酶是目前最具有普遍性和特异性的肿瘤标志物。 有报道,端粒酶活性在晚期结肠癌中的表达高于早期癌,提示端粒酶表达水平的高低可能与肿瘤细胞侵袭与转移有关。 另有报道,对大肠癌患者肠道冲洗液中脱落细胞的端粒酶活性表达进行检测,发现其敏感性为60％,特异性为100％,故很有可能将其用于粪便中大肠癌脱落细胞的早期诊断。 另外,由于端粒酶特异地表达于多种肿瘤细胞,又是肿瘤细胞无限增殖的必要条件,因此针对端粒酶的特异性基因治疗可能具有重大意义。随着研究的深入,端粒酶有可能成为恶性肿瘤基因治疗的新靶点。 4.基因突变和损伤DNA的修复 几个重要定义 突变：指遗传物质突然发生了稳定的可遗传的变化。包括染色体畸变和基因突变两大类。 染色体畸变：指染色体较大范围结构的变化，如缺失、重复、倒位、易位等。 基因突变（gene mutation）：染色体上基因本身的变化，它是生物进化的原动力。 突变体：具有某种突变型的细胞或个体。 主要内容 4.1 基因突变的类型和规律 4.2 诱变剂和诱变机制 4.3 自发突变和适应突变 4.4 损伤DNA的修复 4.1 基因突变的类型和规律 4.1.1 基因的符号 每个基因用斜体小写的三个字母表示，对于同一表型的不同基因，在三个字母后用斜体大写的字母表示：如trpA和trpB. 抗性基因用r表示，如Ampr；s表示敏感；缺陷型右上角加-，如leu-. 表型：基因型lacZ-，表型LacZ- 染色体缺失用△表示，如△（lac、pro） 4.1.2 基因突变的类型 按照表型特征 形态突变型、生化突变型（营养缺陷、抗性）、致死突变型和条件致死突变型； 根据遗传信息的变化 错义突变：一个不同氨基酸的置换