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「炎症の慢性化機構の解明と制御に向けた基盤技術の創出」 H23 年度 平成 23 年度採択研究代表者 実績報告 濡木 理 東京大学大学院理学系研究科・教授 慢性炎症による疾患発症機構の構造基盤 §１．研究実施体制 （１）「濡木」グループ ① 研究代表者：濡木 理 （東京大学大学院理学系研究科、教授） ② 研究項目 ・ 慢性炎症による疾患発症機構の構造基盤の解明 （２）「青木」グループ ① 主たる共同研究者 ：青木 淳賢 （東北大学・大学院薬学研究科、教授） ② 研究項目 ・ 脂質メディエーターによる慢性炎症惹起機構の解明 （3）「徳永」グループ ① 主たる共同研究者：徳永 文稔 （群馬大学生体調節研究所、教授） ② 研究項目 ・ 脱ユビキチン化酵素による NF-κB 制御の分子基盤 1 §２．研究実施内容 (文中に番号がある場合は（３－１）に対応する) A. 「構造生物学」グループ １．ENPP ファミリー分子の慢性炎症における構造機能解明 ENPP2/Autotaxin (ATX) に関しては、我々は、東北大 学の青木博士との共同研究により、マウス由来の ENPP2 と脂肪酸種の異なる 5 種類の LPA の複合体の 立体構造をX 線結晶構造解析によって決定した（図１）。 興味深いことに、脂質ポケットを持つ活性部位に通じる 疎水性チャンネルが存在し、LPA を含まない ENPP2 の 結晶中で endogenous な複数種の LPA が結合をしてい ることを、質量分析により確認した。 図 1．ENPP2 の結晶構造 がって、ENPP2 によって産生された LPA は、ENPP2 のもつ疎水性チャンネルを通って直接LPA 受容体へと 受け渡されることが示唆された（A-1）。さらに、我々は、ENPP2 の阻害剤から出発し、複合体の構 造解析にもとづいて、マウス個体内で LPA の産生を低下させる阻害剤の創出に成功し、大手製薬 会社との共同研究締結に至った。 さらに、ENPP1 は、骨の代謝に深く関わっており、またインスリンレセプターと結合しこれを不活性 化することで、インスリンシグナルを遮断し、II 型糖尿病の原因となることが報告されている。ENPP1 に関して、ENPP2 のシグナル配列を付け替えて HEK293T 細胞で大量調製を行い、AMP や AMPCPP との複合体の結晶構造を 2.7 Å分解能で決定することに成功した。その結果、ENPP2 で 欠失していた挿入ループが基質の認識特異性を発揮していることを明らかにした。さらに、この挿 入ループを欠失させた変異体は、NTP を加水分解する活性を失っただけでなく、ENPP2 様のリゾ ホスホリパーゼ活性を持つことが判明し、ENPP1 と ENPP2 の分子進化に重要な知見を与えた（論 文投稿中）。NPP1 は骨石灰化や II 型糖尿病の原因となるタンパク質であり、本研究で得られた立 体構造情報は、これらの疾病に対する阻害剤開発の基盤となることが期待される。 今後、ENPP2 の産生する LPA 脂質メディエーターの受容体である、LPA 受容体の大量調製系を 確立し、ENPP2 と LPA 受容体の複合体の結晶化を推進する。さらに、リゾリン脂質の一種であるリ ゾホスファチジルセリン(LysoPS) に関して、近年共同研究者の東北大学・青木博士らが同定した LysoPS 産生酵素および LPS 受容体［GPR34 (LPS )、 P2Y10 (LPS )、 P2Y10-related (LPS )、 1 2