定向酶解大豆7S蛋白及其ACE抑制活性的研究.pdfVIP

氨基酸和生物资源 2008，30(2)：18～22 Am／noAcids＆BloticResources 定向酶解大豆7S蛋白及其ACE抑制活性的研究 常 玮 ，施用晖 ，任建东 ，乐国伟¨ (1食品科学与技术国家重点实验室 江南大学，无锡214122 2江南大学食品学院，营养与食品安全研究所，无锡214122) 摘要：以“活性肽搜寻与蛋白模拟水解数据库”为工具，选择胃蛋白酶+胰蛋白酶和碱性蛋白酶对大豆7s蛋白进行模拟 水解，得出不同水平的ACE抑制肽肽段，并通过实验比较以上蛋白酶水解物ACE抑制活性的高低。模拟水解结果表明，胃蛋 白酶+胰蛋白酶水解大豆7s蛋白得到较多的ACE抑制肽肽段，实验结果表明，碱性蛋白酶水解物ACE抑制活性最大，为 73．0965％ 。 关键词：St据库；模拟水解；大豆7S蛋白；ACE抑制肽 中图分类号：TQ464．7 文献标识码：A 文章编号：1006—8376(2008)02—0018—05 蛋白质水解生成活性肽的研究主要集中在酶和 性蛋白酶，Novo公司；胃蛋白酶，Sigma公司；胰蛋白 蛋白质筛选以及酶解条件的优化上，研究者往往是 酶，中国医药上海化学试剂有限公司；注射用抑肽 随机的选择蛋白质和蛋白酶，存在太多盲目和不确 酶，兰州大得利生物化学制药有限公司；喹啉(分析 定的因素，如果是为获得某种生理功能的活性肽，实 纯)，上海亭新化工试剂厂；苯磺酰氯(分析纯)，上 验需要同时筛选蛋白质和蛋白酶，工作量和不确定 海群力化工厂；ACE(活力3．4 U·mg 蛋白)，Sig- 程度增加一倍。然而一些研究者已经意识到将现代 ma公司；Hip—His—Leu，Sigma公司；其它试剂为分 生物信息与生物信息技术相结合建立数据库解决上 析纯。高速大容量冷冻离心机，日本岛津公司；FD 述问题。黎观红等2003年建立活性肽数据库…， 一 1CE冷冻干燥机，北京德天佑科技发展有限公司； Vanessa Vermeirssen等2004年建立蛋白质数据库并 Muhiskan MK3酶标仪，美国Thermo公司；UV一 进行了实验，取得初步成果 j，陈征松等2007年建 2102 PSC型紫外可见分光光度计，尤尼柯(上海)仪 立了活性肽搜寻与蛋白模拟水解数据库 J，但处于 器有限公司；FD一1CE冷冻干燥机，北京德天佑科 理论阶段，需要进一步试验验证，可以通过分子量分 技发展有限公司 布或质谱比较，得到理论与实验相拟合的程度。 1．2 方法 本文研究比较集中的ACE抑制肽，选择含有大 1．2．1利用分析系统模拟水解 量优质蛋白且氨基酸序列较为详尽的大豆7s蛋白 陈征松 建立的“活性肽搜寻与蛋白模拟水解 为蛋白源，利用“活性肽搜寻与蛋白模拟水解数据 数据库”将蛋白质数据库、活性肽数据库、蛋白酶数 库”，模拟大豆7s蛋白水解，得出胃蛋白酶+胰蛋 据库与“定向酶法制备活性肽分析系统”程序配合， 白酶和碱性蛋白酶在制取ACE抑制肽时，可以得到 通过写人程序中的胃蛋白酶+胰蛋白酶和碱性蛋白 不同水平的活性肽段，遂以这两种方式进行水解，比 酶酶切位点，以大豆7S蛋白为蛋白源进行酶切，水 较水解产物的ACE抑制活性，并通过分子量分布， 解完成后再以水解生成的蛋白质肽段逐个与ACE 得到模拟与实验的拟合情况。 抑制肽库中的肽段比对，随后程序生成结果文件，指 出哪些水解片段证实具有活性功能，哪些预测具有 1 材料与方法 活性功能。 1．1 仪器与试剂