宁乡猪生长激素基因的克隆及其原核表达载体的构建.pdfVIP

安徽农业科学，Jom~aal of Anhui Agri．Sci．2008，36(14)：5796—5797 责任编辑 姜丽 责任校对 况玲玲 宁乡猪生长激素基因的克隆及其原核表达载体的构建 王文策 ，褚武英1 7石常友 ，耿梅梅 ，吴信1,2，印遇龙 (1．中国科学院亚热带农业生态研究所，湖南长沙410125；2．中国科学院研究生院，北京 100049) 摘要 『目的]研究了宁乡猪生长激素基因(nxGH)的克隆及其原核表达栽体的构建。【方法]根据已报道的猪生长激素基因序列设计了 1对特异性引物，应用RT-PCR技术从宁乡猪脑垂体中克隆了nxGH编码区序列。【结果]扩增片段全长651 bp，共编码216个氨基酸。 该序列与已报道的三元和五指山猪生长激素cDNA基因核苷酸序列同源性为99．85％。将nxGH cDNA序列定向插入pET一32a原核表 达裁体中，成功构建重组原核表达质粒pET-GH。【结论】为下一步制备宁乡猪生长激素抗体奠定了基础。 关键词 宁乡猪；生长激素基因；克隆；原核表达；构建 中图分类号 Q785 文献标识码 A 文章编号 0517—6611(2008)14—05796—02 Cloning of Ningxiang Porcine Growth Hormone Gene and Construction of Its Prokaryotic Expression Vector WANG Wen-ce et al fInstitute of Subtropical Agricuhure，the Chinese Academy of Sciences，Changsha，Hunan 410125) Abstract 【0bjective]The research aimed to study on the clone of Ningxiang porcine growth hormone geHe,、nxGH)and the construction of its prokaryofic expresSiOn vectori 【Method1 One special primer was designed based on the repoaed porcine growth hormone gene order．The coding seⅡuence of nxGH was Cloned from pituitary of Ningxiang porcine by using RT-PCRl【Result]The entire open reading flame of the nxGH was 651 bp and codified 216 amino acid residues．The nucleotides identity between the nxGH and the repoaed porcine growth hormone gene was 99．85％． The nxGH was inse~ed into Drokaryotic expression vector(pET-32a)and the recombination vector pET-GH was constructed 【Conclusion]The study estabhshed the foundation for preparing Ningxiang porcine growth hormone antibody in future． Key words Ningxiang pig；Growth hormone gene；Clone；Prokaryotic expression：Construction 宁乡猪属于我国较古老的优良地方品种，因其早熟易 P2下划线分别为 oRI．Sa／I酶切位点。以宁乡猪脑垂体为 肥、繁殖性能好、抗病力强、肉质细嫩鲜美、肌肉中夹有较多 模板，用引物P1和P2扩增宁乡猪生长激素基因cDNA。 脂肪、仔猪烤制皮不开裂等特点而享誉中外哪。宁乡猪在华 PCR扩增条件为：94℃预变性5 rain；．94℃变性30 s，54℃退 北、东北、西北、华南等地饲养，均具有较强的适应性，除了 火30 s，72℃聚合45 s，30个循环；72℃延伸10 min。 有较