微小RNAmiR-26a的克隆及其慢病毒表达载体的构建.pdfVIP

• 426 • Journal of Tropical Medicine Vo1.8 No.5 Mav.2008 [文章制 1672-3619(2鹏)05-0426-03 .硕博专栏论著· 微小RNA miR-26a 的克隆及其慢病毒表达载体的构建 鲁娟 1 ，王爽2 ，揭荣荣 3 ，姚开泰 1* (1.南方医科大学肿瘤研究所，广州 510515; 2. 南方医科大学病理学教研室， 广州 510515; 3. 南方医科大学中医药学院，广州 510515) [摘要】 目的 克隆微小 RNA hsa-miR-26a 并构建其慢病毒表达载体。方法将PCR 扩增得到的 miR响26a 前体序列和plVTHM 载体经双酶切后连接产生 pIVTHM-miR-26a 慢病毒表达载体，双酶切后测序鉴定，筛选阳性 克隆。用 pIVTHM-mìR-26a、 psPAX2 和 pMD2.G 3 质粒共转染包装细胞 293凹，包装产生慢病毒，以 293Ff细胞绿 色荧光蛋白(green fluorescent protein ,GFP) 的表达水平测定病毒滴度。结果 经双酶切鉴定和测序证实，成功构 建了 miR-26a 的慢病毒表达载体pIVTHM-miR-26a。倒置荧光显微镜下观察可见包装细胞 293阿呈绿色荧光，并 测得病毒滴度为 5 x 1()5 TU/ml。成功构建 hsa-mìR-26a 的慢病毒表达载体，为深入研究 miR-26a 的生物学功能 奠定了基础。 {关键词J hsa-miR-2臼;肿瘤;慢病毒 中图分类号:R739.6 文献标识码:A Cloning of hsa-miR-26a and Construction of 1也Lentiviral Expression Vector 1 1 LU Juan , WANG Shuan矿， JIE Rong-ron矿， YAO Kai-tai * (1.1nstitute of Cancer Research , Southern Medic a1 University , Guangzhou 510515; 2.Dep刷刷nt of Pωhology ， Southern Medic a1 University , Guangzhou 510515; 3.Dep刷刷nt of Trooitiona1 Chinese Medicìne , Southern Medic a1 Universi妙， Guan伊hou 510515 , China) [Abstract 0均创刊 To construct a lentìviral expression vector for hsa-mìR剖a. Me也础The pre-mir-26a- 1 amplìfied by PCR was ìnserted into plVl旧M. 响le recombìnant plasmid pIVTHM-miR-26a wωconfirmed by restriction endonuclease analysis and DNA sequencing. 293 Ff cells were cotransfected wi出 lentivìral vector plVl旧M-miR-2缸， psPAX2 and pMD2.G. All vìrus stocks were produced by calcium phosphate-mediated lransfection. Virus titer was